ගෝලීය ආහාර හිඟයට පිළියම් යෙදීමේදී සහ වාහක මගින් බෝවන මානව රෝගවලට එරෙහිව සටන් කිරීමේදී පළිබෝධනාශක තීරණාත්මක කාර්යභාරයක් ඉටු කරයි. කෙසේ වෙතත්, පළිබෝධනාශක ප්රතිරෝධය පිළිබඳ වර්ධනය වන ගැටලුවට, ඌන-භාවිත ඉලක්ක ඉලක්ක කරන නව සංයෝග සොයා ගැනීම හදිසි අවශ්යතාවයක් වේ. කෘමි අස්ථිර ප්රතිග්රාහක විභවය (TRPV) නාලිකා - නැන්ෂොං (නැන්) සහ අක්රිය (Iav) - විෂමජාතීය නාලිකා (Nan-Iav) සෑදිය හැකි අතර කෘමීන් තුළ භූ-උරාබීම, ශ්රවණය සහ ප්රොප්රියෝසෙප්ෂන් සඳහා මැදිහත් වන යාන්ත්රික සංවේදක අවයව වලට ස්ථානගත කළ හැකිය. ඇෆිඩොපිරොලිඩෝන් (AP) වැනි සමහර පළිබෝධනාශක, නොදන්නා යාන්ත්රණ හරහා නැන්-අයාව් ඉලක්ක කරයි. AP විදින-උරා බොන කෘමීන්ට (hemipterans) එරෙහිව ඵලදායී වන අතර, සූතිකා වල ක්රියාකාරිත්වයට බාධා කිරීමෙන් පෝෂණය වීම වළක්වයි. AP හට නැන් සමඟ පමණක් බැඳිය හැකි නමුත්, එන්ඩොජෙනස් නිකොටිනාමයිඩ් (NAM) ඇතුළු ඇගෝනිස්ට් සමඟ අන්තර් ක්රියා කළ හැකි අතර එමඟින් නාලිකා ක්රියාකාරිත්වය ප්රදර්ශනය කරයි. කෘමිනාශක ඉලක්කයක් ලෙස නැන්-අයාව් හි විභවය තිබියදීත්, එහි නාලිකා එකලස් කිරීම, නියාමන බන්ධන ස්ථාන සහ Ca2+-යැපෙන නියාමනය ගැන එතරම් දැනුමක් නැත, එය තවදුරටත් කෘමිනාශක සංවර්ධනයට බාධා කරයි. මෙම අධ්යයනයේ දී, කැල්මොඩුලින්-ලිගන්ඩ්-නිදහස් තත්වයේ හෙමිප්ටෙරා කෘමීන් තුළ නැන්-අයව් ව්යුහය මෙන්ම ඇන්කිරින් පුනරාවර්තන සයිටොප්ලාස්මික් වසමේ (ARD) මායිමේ AP සහ NAM සමඟ ක්රියෝ-ඉලෙක්ට්රෝන අන්වීක්ෂය භාවිතා කරන ලදී. පුදුමයට කරුණක් නම්, නැන් ප්රෝටීනයටම පෙන්ටාමරයක් සෑදිය හැකි බව අපට පෙනී ගිය අතර එය AP-මැදිහත් වූ ARD අන්තර්ක්රියා මගින් ස්ථාවර වේ. මෙම අධ්යයනයෙන් කෘමිනාශක සහ ඇගෝනිස්ට් සහ නැන්-අයව් අතර අණුක අන්තර්ක්රියා හෙළි වන අතර, නාලිකා ක්රියාකාරිත්වය සහ එකලස් කිරීමේදී ARD හි වැදගත්කම ඉස්මතු කරන අතර Ca2+ නියාමනයේ යාන්ත්රණය ගවේෂණය කරයි.
දිනෙන් දින දරුණු වන ගෝලීය දේශගුණික විපර්යාසවල පසුබිමට එරෙහිව, පිරිහෙන ගෝලීය ආහාර සුරක්ෂිතතාව 21 වන සියවසේ ප්රධාන අභියෝගයක් වන අතර එය සමාජයට අනපේක්ෂිත ප්රතිවිපාක ගෙන දේ.1,2, 1,2,ලෝක සෞඛ්ය සංවිධානයේ 2023 ලෝකයේ ආහාර සුරක්ෂිතතාව සහ පෝෂණ තත්ත්වය (SOFI) වාර්තාව ඇස්තමේන්තු කර ඇත්තේ ලොව පුරා බිලියන 2.33 ක් පමණ ජනතාවක් දිගුකාලීන ගැටලුවක් වන මධ්යස්ථ හා දරුණු ආහාර අනාරක්ෂිතභාවයෙන් පෙළෙන බවයි.3,4, 3,4,අවාසනාවකට, වාර්ෂිකව බෝග අස්වැන්නෙන් 20% සිට 30% දක්වා හෝ ඊට වැඩි ප්රමාණයක් පළිබෝධ සහ රෝග කාරක නිසා අහිමි වන අතර, ගෝලීය උණුසුම ඉහළ යාම පළිබෝධ ප්රතිරෝධය සහ බෝග අවදානම උග්ර කරනු ඇතැයි අපේක්ෂා කෙරේ.4,5,6,7,8,පළිබෝධකයන්ගෙන් බෝග ආරක්ෂා කිරීමට සහ වාහක මගින් බෝවන රෝග කාරක පැතිරීම අඩු කිරීමට පමණක් නොව, ඩෙංගු උණ, මැලේරියාව සහ චාගස් රෝගය වැනි වාහක මගින් බෝවන මිනිස් රෝග මර්දනය කිරීමට ද පළිබෝධනාශක සංවර්ධනය ඉතා වැදගත් වේ. මෙම රෝග පළිබෝධනාශක වලට වැඩි වැඩියෙන් ප්රතිරෝධී වේ.5,9,10,11,
ස්නායු විෂ සහිත කෘමිනාශකවල ප්රධාන ඉලක්ක අතර, විෂම ටෙට්රාමරික් TRPV නාලිකාව වන නැන්චුන්ග් (නැන්)-අක්රිය (අයිඒවී) යනු පසුගිය දශකය තුළ පමණක් සොයා ගන්නා ලද කෘමිනාශක ඉලක්ක කාණ්ඩයක් වන අතර, එයට ඉමිඩැක්ලෝප්රිඩ් සහ පිරක්ලොස්ට්රොබින් වැනි වාණිජමය වශයෙන් ලබා ගත හැකි කෘමිනාශක ඇතුළත් වේ.12,13,14,අර්ධ සින්තටික් කෘමිනාශක ඇෆිඩොපිරොලිෆෙන් (AP) යනු මෑතකදී සංවර්ධනය කරන ලද සහ වාණිජකරණය කරන ලද නිෂ්පාදනයක් වන අතර එහි ප්රධාන සංරචකය වන්නේ ක්රියාකාරී කෘමිනාශක Inscalis® වන අතර එය AP උප නැනෝමෝලර් ක්රියාකාරකම් මට්ටමින් බන්ධනය කරයි.15AP පරාග වාහකයන්ට, ප්රයෝජනවත් කෘමීන්ට සහ අනෙකුත් ඉලක්කගත නොවන ජීවීන්ට අඩු උග්ර විෂ සහිත බවක් පෙන්නුම් කරන අතර, ලේබල් උපදෙස් අනුව භාවිතා කරන විට, අනෙකුත් කෘමිනාශක වලට ඇති ප්රතිරෝධක පීඩනය අඩු කළ හැකිය.16,17,18නැන් සහ අයිව් කෘමි විශේෂ පුරා බහුලව ව්යාප්ත වී ඇති අතර, ඇන්ටෙනාවේ සහ අත් පා වල ස්වර දිගු ප්රතිග්රාහක නියුරෝන වල පමණක් සම-ප්රකාශිත වන අතර, ශ්රවණය, ගුරුත්වාකර්ෂණ සංජානනය සහ ප්රොප්රියෝසෙප්ෂන් සඳහා ඉතා වැදගත් වේ.13,16,19,20,21,22,AP, ඉමිඩක්ලොප්රිඩ් සහ පිරක්ලොස්ට්රොබින් අද්විතීය යාන්ත්රණයක් හරහා නන්-අයව් සංකීර්ණය උත්තේජනය කරන අතර අවසානයේ ප්රොප්රියෝසෙප්ටිව් සංඥා සම්ප්රේෂණය වළක්වයි.13,16,23කුඩිත්තන් සහ සුදු මැස්සන් වැනි විදින-උරා බොන කෘමීන් (hemipterans) වල, proprioception නැතිවීම ඔවුන්ගේ ආහාර ගැනීමේ හැකියාව අඩාල කරන අතර අවසානයේ මරණයට හේතු වේ.13,24, 13,24,සිත්ගන්නා කරුණ නම්, AP, Nan-Iav සංකීර්ණය සඳහා ඉහළ සම්බන්ධතාවයක් සහ Nan සඳහා පමණක් අඩු සම්බන්ධතාවයක් පෙන්නුම් කරයි. AP, Nan-Iav වෙත බන්ධනය කිරීමෙන් විද්යුත් ධාරාවක් ඇති කරයි, නමුත් Nan වෙත පමණක් බන්ධනය වීමෙන් නාලිකා ක්රියාකාරිත්වය උත්තේජනය නොවේ. Iav විසින්ම AP වෙත කිසිසේත් බන්ධනය නොවේ.16මෙයින් ඇඟවෙන්නේ නැන් සහ අයිව් විවිධ නැන්-අයිව් නාලිකා සංකීර්ණ සෑදීමට බන්ධනය විය හැකි බවයි (උදා: විවිධ ස්ටොයිකියෝමිතික අනුපාත හෝ එකම ස්ටොයිකියෝමිතික අනුපාතය තුළ විවිධ සැකසුම් සමඟ) හෝ ඒපී බහු අඩවි වලට බන්ධනය විය හැකි බවයි. තවද, ස්වාභාවික ඇගෝනිස්ට් නිකොටිනාමයිඩ් (NAM) ඩ්රොසෝෆිලා නැන්-අයිව් සමඟ ක්ෂුද්රමෝලර් සම්බන්ධතාවයකින් බන්ධනය වන අතර, විට්රෝ හි කුඩිත්තන්ගේ (AP) බලපෑම් වලට සමාන බලපෑම් පෙන්නුම් කරයි.16,25සහ කුඩිත්තන්ගේ ප්රජනනය සහ පෝෂණය වැළැක්වීම, අවසානයේ ඔවුන්ගේ මරණයට හේතු වේ.25,26, 25,. මෙම දත්ත බොහෝ ප්රශ්න මතු කරයි. නිදසුනක් ලෙස, නැන්-අයව් විෂම ධමකය සෑදෙන්නේ කෙසේද, කුඩා අණු මොඩියුලේට් කිරීමට භාවිතා කරන බන්ධන ස්ථාන මොනවාද සහ මෙම කුඩා අණු ප්රොප්රියෝසෙප්ෂන් මර්දනය කිරීමෙන් නාලිකා ක්රියාකාරිත්වය නියාමනය කරන්නේ කෙසේද යන්න තවමත් පැහැදිලි නැත. තවද, නැන් අක්රිය වීමට සහ AP සඳහා අඩු සම්බන්ධතාවයක් ඇති වීමට හේතු, නැන්-අයව් විෂම ධමකය ක්රියාකාරී වන අතර AP ඉහළ සම්බන්ධතාවයකින් බන්ධනය කරයි. අවසාන වශයෙන්, නැන්-අයව් ශ්රිතයේ Ca2+-යැපෙන නියාමනය සහ එය ස්නායු සංඥා ක්රියාවලීන්ට ඒකාබද්ධ කරන්නේ කෙසේද යන්න පිළිබඳව එතරම් දැනුමක් නැත.. 13,21.
මෙම අධ්යයනයේ දී, ක්රියෝ-ඉලෙක්ට්රෝන අන්වීක්ෂය, විද්යුත් භෞතවේදය සහ රේඩියෝලිගන්ඩ් බන්ධන ශිල්පීය ක්රම ඒකාබද්ධ කරමින්, අපි නැන්-අයව් එකලස් කිරීම සහ කුඩා අණු නියාමකයින්ට එය බන්ධනය කිරීමේ යාන්ත්රණය පැහැදිලි කළෙමු. තවද, අපි ව්යුහාත්මකව බැඳී ඇති කැල්මොඩුලින් (CaM) Iav සහ AP-ස්ථායී කළ නැන් පෙන්ටමර් වලට අනාවරණය කර ගත්තෙමු. මෙම ප්රතිඵල නාලිකා වල කැල්සියම් අයන නියාමනය, නාලිකා එකලස් කිරීම සහ ලිගන්ඩ් බන්ධන සම්බන්ධතාවය තීරණය කරන සාධක පිළිබඳ වැදගත් අවබෝධයක් ලබා දෙයි. වඩාත් වැදගත් ලෙස, මෙම ක්රියාවලීන්හි ARD කේන්ද්රීය කාර්යභාරයක් ඉටු කරන බව අපි තහවුරු කළෙමු. අදාළ කෘෂිකාර්මික පළිබෝධනාශකවලට බැඳී ඇති සම්පූර්ණ කෘමි නාලිකා පිළිබඳ අපගේ අධ්යයනය.27, 28, 29පළිබෝධනාශක කර්මාන්තයේ දියුණුව සඳහා අපේක්ෂාවන් විවෘත කරයි, පළිබෝධනාශකවල කාර්යක්ෂමතාව සහ නිශ්චිතභාවය වැඩිදියුණු කරයි, සහ ගෝලීය ආහාර සුරක්ෂිතතාව සහ දෛශික මගින් බෝවන රෝග පැතිරීම වැළැක්වීම සඳහා අනෙකුත් විශේෂවලට TRPV ඉලක්ක කරගත් සංයෝග යෙදීමට හැකියාව ලබා දෙයි.
නැන්-අයව් Ca2+ මගින් නියාමනය වන බවත්, නියාමනයේ යාන්ත්රණය ව්යුහාත්මකව බැඳී ඇති CaM මගින් මැදිහත් වන බවත් අපට පෙනී ගියේය. වැදගත් වන්නේ, CaM මගින් Nav හි මෙම Ca2+-යැපෙන නියාමනය අනෙකුත් අයන නාලිකා නියාමනය කිරීමේ යාන්ත්රණයන්ට වඩා සැලකිය යුතු ලෙස වෙනස් වීමයි (උදා: වෝල්ටීයතාවයෙන් යුත් Na+ නාලිකා සහ TRPV5/6 නාලිකා)52,53,54,55,56,57,. Nav1.2 නාලිකාවේ, CaM හි C-පර්යන්ත වසම C-පර්යන්ත වසම (CTD) සමඟ සර්පිලාකාරව සම්බන්ධ වන අතර, Ca2+ එහි N-පර්යන්ත වසම CTD හි දුරස්ථ කොටසට බන්ධනය කරයි.56. TRPV5/6 නාලිකාවේ, CaM හි C-පර්යන්ත වසම CTH සමඟ බන්ධනය වන අතර, Ca2+ එහි N-පර්යන්ත වසම සිදුරු තුළට ඉහළට දිගු කිරීම ප්රේරණය කරයි, එමඟින් කැටායන පාරගම්යතාව අවහිර කරයි.53,54, 53, 4, 53, 53, 54, 53, 54, 53, 54, 53, 54, 53,. Nan-Iav-CaM හි Ca2+-නියාමනය කරන ලද ක්රියාකාරිත්වය සඳහා අපි ආකෘතියක් යෝජනා කරමු (රූපය 4h). මෙම ආකෘතියේ දී, CaM හි N-පර්යන්ත වසම Iav හි C-පර්යන්ත වසමට (CTH) ව්යුහාත්මකව බන්ධනය වේ. විවේක තත්වයේදී (අඩු [Ca2+] සාන්ද්රණය), CaM හි C-පර්යන්ත වසම Nan සමඟ අන්තර් ක්රියා කරයි, ARD අනුකූලතාව ස්ථාවර කරයි සහ එමඟින් නාලිකා විවෘත කිරීම ප්රවර්ධනය කරයි. ඇගෝනිස්ට්/කෘමිනාශකයක් නාලිකාවට බන්ධනය කිරීම සිදුරු විවෘත කිරීමක් ඇති කරයි, එය Ca2+ ගලා ඒමට හේතු වේ. පසුව Ca2+ CaM සමඟ බන්ධනය වන අතර, C-පර්යන්ත වසම Nan හි ARD වෙතින් විඝටනය වීමට හේතු වේ. CaM බන්ධනය අවහිර කිරීම අත්යවශ්යයෙන්ම Ca2+ හි නිෂේධනීය බලපෑම අහෝසි කරන බැවින්, මෙම විඝටනය ARD සංචලනය මොඩියුලේට් කරයි, එමඟින් Ca2+-යැපෙන නිෂේධනය හෝ desensitization ඇති කරයි. කැල්සියම් අයන ඉවත් කිරීමෙන් පසු නාලිකා ධාරා වේගයෙන් යථා තත්ත්වයට පත් කිරීමෙන් (රූපය 4g) යෝජනා කරන්නේ මෙම යාන්ත්රණය Ca2+-මැදිහත් වූ ස්නායු සංඥා වලට වේගවත් ප්රතිචාර සඳහා පහසුකම් සපයන බවයි. තවද, දුර්වල ලෙස තේරුම් ගෙන ඇති Iav හි C-පර්යන්ත කලාපය, නාලිකා ඉලක්ක කිරීමේ සහ වත්මන් නියාමනයේ වෙනත් භූමිකාවන් ඉටු කරන බව වාර්තා වී ඇත.21
අවසාන වශයෙන්, අපගේ අධ්යයනය මගින් කෘෂිකාර්මික වැදගත්කමක් ඇති කෘමිනාශක-කෘමිනාශක TRP නාලිකා සංකීර්ණයක අධි-විභේදන ව්යුහය ඉදිරිපත් කරයි - එය අප කලින් නොදන්නා සොයා ගැනීමකි. සැලකිය යුතු ලෙස, අපි කෘමි සෛලවල නොව මිනිස් සෛලවල (HEK293S GnTi–) කෘමි නාලිකාවේ ව්යුහය සහ ක්රියාකාරිත්වය සංලක්ෂිත කළෙමු. වර්ධනය වන කෘමිනාශක ප්රතිරෝධය සහ ආහාර සුරක්ෂිතතාව සහ රෝග කාරක මත අඛණ්ඩ පීඩනය හමුවේ, අපගේ කාර්යය මානව සෞඛ්ය සහ ගෝලීය ආහාර සුරක්ෂිතතාව සඳහා නව කෘමිනාශක සංවර්ධනයට පහසුකම් සපයන වැදගත් තොරතුරු සපයයි. ලේබල් උපදෙස් අනුව භාවිතා කරන විට AP වැනි කෘමිනාශක සමහර පළිබෝධකයන්ට එරෙහිව ඵලදායී වන අතර ඒවායේ පාරිසරික ආරක්ෂාව පෙන්නුම් කරමින් ප්රයෝජනවත් පරාග වාහකයන්ට අඩු උග්ර විෂ සහිත බව අධ්යයනයන් පෙන්වා දී ඇත.13,16,තවද, මදුරුවන් මත සමහර AP ව්යුත්පන්නයන් පරීක්ෂා කිරීමෙන් පෙන්නුම් කර ඇත්තේ ඔවුන්ට අවසානයේ පියාසර කිරීමේ හැකියාව අහිමි වන බවයි. මෙම මොඩියුලේටින් සංයෝග Nan-Iav සමඟ බන්ධනය වන ආකාරය අවබෝධ කර ගැනීම, පවතින සංයෝග වෙනස් කිරීමට හෝ වඩාත් ඵලදායී සහනිරවද්යපළිබෝධ පාලනය. අපගේ අධ්යයනයෙන් පෙන්නුම් කරන්නේ නන්-අයව් ARD අතුරුමුහුණත අන්තරාසර්ග සංයෝග, පළිබෝධනාශක සහ Ca2+-CaM වල ක්රියාකාරිත්වය නියාමනය කිරීම සඳහා පමණක් නොව, නාලිකා එකලස් කිරීම සඳහා ද ඉතා වැදගත් බවයි. කුඩා අණු සමඟ විෂම ධම එකලස් කිරීම කඩාකප්පල් කිරීම අයන නාලිකා නිෂේධක සංවර්ධනය කිරීම සඳහා අද්විතීය සහ පොරොන්දු වූ ප්රවේශයක් විය හැකි බව අපි යෝජනා කරමු.
විකලාංග ජාන අටෙන්, ඩිටර්ජන්ට් වල විශිෂ්ට ස්ථායිතාවයක් පෙන්නුම් කරන දුඹුරු කුරුමිණියාගේ (හැලියෝමෝර්ෆා හැලිස්) නැන්චුන්ග් සහ අක්රියගේ සම්පූර්ණ දිග ජාන තෝරා ගන්නා ලදී. සංස්ලේෂණය කරන ලද ජාන මිනිස් ප්රකාශනය සඳහා කෝඩෝන-ප්රශස්තිකරණය කරන ලද අතර XhoI සහ EcoRI සීමා කිරීමේ අඩවි භාවිතා කරමින් pBacMam pCMV-DEST දෛශිකය (ජීවිත තාක්ෂණයන්) තුළට ක්ලෝන කරන ලදී. මෙය ක්ලෝන C-පර්යන්ත GFP-FLAG-10xHis සහ mCherry-FLAG-10xHis ටැග් සමඟ රාමුවක ඇති බව සහතික කරන ලද අතර ඒවා HRC-3C ප්රෝටීස් (PPX) මගින් වෙන් කරනු ලැබේ, ස්වාධීන වීමට ඉඩ සලසයි.ප්රකාශනය. නැන්චුන්ග් සහ ඉන්ඇක්ටිව් pBacMam දෛශිකයට ක්ලෝන කිරීමට භාවිතා කළ ප්රයිමර් පහත පරිදි විය:
K3 කැමරාවක් සහ Gatan BioQuantum ශක්ති පෙරහනකින් සමන්විත Titan Krios G2 සම්ප්රේෂණ ඉලෙක්ට්රෝන අන්වීක්ෂයක් (FEI) මත තනි අංශුවල අන්වීක්ෂීය රූප ලබා ගන්නා ලදී. අන්වීක්ෂය 300 keV හිදී ක්රියාත්මක කරන ලද අතර, ශක්ති සැකසුම 20 eV, සාම්පල පික්සල ප්රමාණය 1.08 Å/පික්සල (නාමික විශාලනය 81,000x) සහ -0.8 සිට -2.2 μm දක්වා පරාසයක නාභිගත කිරීමේ අනුක්රමණයක් ඇත. 25 e–px−1 s−1 නාමික මාත්රා අනුපාතයක්, තත්පර 2.4 ක නිරාවරණ කාලයක් සහ ආසන්න වශයෙන් 60 e–Å−2 මුළු මාත්රාවක් සහිත Latitude S අන්වීක්ෂයක් (Gatan) භාවිතයෙන් තත්පරයට රාමු 40 කින් වීඩියෝ පටිගත කිරීම සිදු කරන ලදී.
RELION 4.061 හි MotionCor2 භාවිතයෙන් කදම්භ-ප්රේරිත චලන නිවැරදි කිරීම සහ මාත්රා බර තැබීම සිදු කරන ලදී. පැච්-පාදක CTF ඇස්තමේන්තු ක්රමය62 භාවිතා කරමින් cryoSPARC හි ප්රතිවිරුද්ධ හුවමාරු ශ්රිතය (CTF) පරාමිති ඇස්තමේන්තුව සිදු කරන ලදී. CTF සවි කිරීමේ විභේදනය ≥4 Å සහිත ෆොටෝමයික්රොග්රැෆ් පසුකාලීන විශ්ලේෂණයෙන් බැහැර කරන ලදී. සාමාන්යයෙන්, ක්රියෝඑස්පීආර්සී හි ලක්ෂ්ය තේරීම සඳහා 500–1000 ෆොටෝමයික්රොග්රැෆ් උප කුලකයක් භාවිතා කරන ලද අතර, පසුව සැකිලි-පාදක අංශු තේරීම සඳහා පැහැදිලි යොමු රූපයක් ලබා ගැනීම සඳහා පෙරීමෙන් පසු 2D වර්ගීකරණයේ වට කිහිපයක් භාවිතා කරන ලදී. ඉන්පසු අංශු 64-පික්සල් සීමා කිරීමේ පෙට්ටි සහ 4-නැමුණු බිනින් භාවිතයෙන් නිස්සාරණය කරන ලදී. අනවශ්ය අංශු කාණ්ඩ ඉවත් කිරීම සඳහා 2D වර්ගීකරණයේ වට කිහිපයක් සිදු කරන ලදී. ආරම්භක 3D ආකෘතිය ab initio ප්රතිසංස්කරණය භාවිතයෙන් ප්රතිනිර්මාණය කරන ලද අතර ක්රියෝඑස්පීආර්සී හි ඒකාකාර නොවන පිරිපහදු කිරීම භාවිතයෙන් පිරිපහදු කරන ලදී. ARD විෂමජාතීයතාවය මත පදනම්ව ක්රියෝඑස්පීආර්සී හෝ RELION හි ත්රිමාණ වර්ගීකරණය සිදු කරන ලදී. පටල වසම්වල සැලකිය යුතු විෂමජාතීයතාවයක් නිරීක්ෂණය නොවීය. C1 සහ C2 ක්රම භාවිතයෙන් අංශු පිරිපහදු කරන ලදී; ඉහළ C2 විභේදනයක් සහිත අංශු C2 ට සාපේක්ෂව සමමිතික ලෙස සලකනු ලැබූ අතර බේසියානු පිරිපහදු කිරීම සඳහා RELION වෙත ආනයනය කරන ලදී. ඉන්පසු අංශු අවසාන ඒකාකාර නොවන සහ දේශීය පිරිපහදු කිරීම සඳහා නැවත ක්රියෝස්පාර්ක් වෙත මාරු කරන ලදී. අවසාන විභේදනය සහ අංශු ගණන 1 වගුවේ දක්වා ඇත.
Nan+AP පෙන්ටමර් සැකසීමේදී, සංඥා අඩු කිරීම සහ TMD ආවරණ කිරීම වැනි පටල වසම්වල (විශේෂයෙන් සිදුරු කලාපයේ) විභේදනය වැඩි දියුණු කිරීම සඳහා විවිධ ක්රම අපි ගවේෂණය කළෙමු. කෙසේ වෙතත්, සිදුරු කලාපයේ ඇති විය හැකි අධික ආබාධය සහ TMD හි සමස්ත විෂමතාවය හේතුවෙන් මෙම උත්සාහයන් අසාර්ථක විය. අවසාන විභේදනය ගණනය කරන ලද්දේ ප්රධාන වශයෙන් ARD කලාපය ඉලක්ක කර ගනිමින්, ක්රියෝස්පාර්ක් හි ඒකාකාර නොවන සැකසුම් ක්රමය මඟින් ස්වයංක්රීයව ජනනය කරන ලද ආවරණයක් භාවිතා කරමිනි. මෙය පටල වසම්වල (විශේෂයෙන් VSLD කලාපයේ) විභේදනයට වඩා සැලකිය යුතු ලෙස ඉහළ විභේදනයක් ලබා ගත්තේය.
නැන්චුන්ග් සහ අක්රිය දෝෂ වල අපෝ ආකාරවල ආරම්භක නව ආකෘති මුලින්ම Coot63 භාවිතයෙන් ජනනය කරන ලද අතර, අඩු විශ්වාසනීය කලාප හඳුනා ගැනීම සඳහා Nan සහ Iav දෝෂ වල ආකෘති AlphaFold264 භාවිතයෙන් ජනනය කරන ලදී. කැල්මොඩුලින් ආකෘති නිර්මාණය පිළිවෙලින් PDB ප්රවේශයන් 4JPZ56 සහ 1CFD65 හි Ca2+-බන්ධන සහ Ca2+-නිදහස් ආකෘතිවල දෘඩ-ශරීර ගැලපීම් මත පදනම් විය. නිවැරදි ස්ටීරියෝ රසායන විද්යාව සහ හොඳ ජ්යාමිතිය සහතික කිරීම සඳහා ගෝලාකාර පිරිපහදු කිරීම භාවිතයෙන් ආකෘති පිරිපහදු කරන ලදී. පසුව පොස්ෆැටිඩයිල්කොලීන්, පොස්ෆැටිඩයිලෙතනොලමයින් සහ පොස්ෆැටිඩයිල්සෙරීන් හොඳින් අර්ථ දක්වා ඇති ලිපිඩ ඝනත්වයන් ලෙස ආකෘතිගත කරන ලද අතර, NAM සහ AP ලිගන්ඩ් තද සන්ධිවල අනුරූප ඝනත්වයන්හි තැන්පත් කරන ලදී. PHENIX66 හි eLBOW භාවිතා කරමින් සමස්ථානික වල SMILES නූලෙන් සීමා ගොනු ජනනය කරන ලදී. අවසාන වශයෙන්, ද්විතියික ව්යුහ සීමාවන් සමඟ දේශීය ජාලක සෙවීම සහ ගෝලීය අවම කිරීම භාවිතා කරමින් PHENIX හි සැබෑ අවකාශයේ ආකෘති පිරිපහදු කරන ලදී. ආකෘති පිරිපහදු කිරීම සහ ව්යුහාත්මක විශ්ලේෂණය සඳහා MolProbity සේවාදායකය භාවිතා කරන ලද අතර, PyMOL සහ UCSF Chimera X භාවිතයෙන් නිදර්ශන සිදු කරන ලදී. 67,68,69 HOLE සේවාදායකය භාවිතයෙන් විවර විශ්ලේෂණය සිදු කරන ලද අතර, 70 Consurf සේවාදායකය භාවිතයෙන් අනුක්රමික සංරක්ෂණ සිතියම්ගත කිරීම සිදු කරන ලදී.71
සංඛ්යානමය විශ්ලේෂණය Igor Pro 6.2, Excel Office 365 සහ GraphPad Prism 7.0 භාවිතයෙන් සිදු කරන ලදී. සියලුම ප්රමාණාත්මක දත්ත මධ්යන්ය ± සම්මත දෝෂය (SEM) ලෙස ඉදිරිපත් කෙරේ. කණ්ඩායම් දෙකක් සංසන්දනය කිරීම සඳහා ශිෂ්යයාගේ t-පරීක්ෂණය (වලිග දෙක, යුගල නොකළ) භාවිතා කරන ලදී. බහු කණ්ඩායම් සංසන්දනය කිරීම සඳහා ඩනට්ගේ පශ්චාත් කාලීන පරීක්ෂණයෙන් පසුව විචලතාව පිළිබඳ ඒක-මාර්ග විශ්ලේෂණය (ANOVA) භාවිතා කරන ලදී. *P< 0.05, **ප< 0.01, සහ ***Pදත්ත ව්යාප්තිය අනුව < 0.001 සංඛ්යානමය වශයෙන් වැදගත් යැයි සැලකේ. Kd, Ki අගයන් සහ ඒවායේ අසමමිතික 95% විශ්වාසනීය අන්තරයන් GraphPad Prism 10 භාවිතයෙන් ගණනය කරන ලදී.
අධ්යයන ක්රමවේදය පිළිබඳ වැඩි විස්තර සඳහා, කරුණාකර මෙම ලිපියේ සම්බන්ධ කර ඇති Nature Portfolio වාර්තා සාරාංශය බලන්න.
ආරම්භක ආකෘතිය PDB 4JPZ සහ 1CFD දත්ත සමුදායන්ගෙන් ලබාගත් කැල්මොඩුලින් ආකෘති භාවිතයෙන් ගොඩනගා ඇත. ඛණ්ඩාංක ප්රෝටීන් දත්ත බැංකුවේ (PDB) ප්රවේශ අංක 9NVN (ලිගන්ඩ් නොමැතිව Nan-Iav-CaM), 9NVO (නිකොටිනාමයිඩ් සමඟ බැඳී ඇති Nan-Iav-CaM), 9NVP (නිකොටිනාමයිඩ් සහ EDTA සමඟ බැඳී ඇති Nan-Iav-CaM), 9NVQ (ඇෆීනිඩොල්පිරොලයින් සහ කැල්සියම් සමඟ බැඳී ඇති Nan-Iav-CaM), 9NVR (ඇෆීනිඩොල්පිරොලයින් සහ EDTA සමඟ බැඳී ඇති Nan-Iav-CaM) සහ 9NVS (ඇෆීනිඩොල්පිරොලයින් සමඟ බැඳී ඇති Nan පෙන්ටමර්) යටතේ තැන්පත් කර ඇත. අනුරූප ක්රියෝ-ඉලෙක්ට්රෝන අන්වීක්ෂ රූප ඉලෙක්ට්රෝන අන්වීක්ෂ දත්ත සමුදායේ (EMDB) පහත සඳහන් ප්රවේශ අංක යටතේ තැන්පත් කර ඇත: EMD-49844 (ලිගන්ඩ් නොමැතිව Nan-Iav-CaM), EMD-49845 (නිකොටිනාමයිඩ් සමඟ Nan-Iav-CaM සංකීර්ණය), EMD-49846 (නිකොටිනාමයිඩ් සහ EDTA සමඟ Nan-Iav-CaM සංකීර්ණය), EMD-49847 (ඇෆිඩොපිරොලයින් සහ කැල්සියම් සමඟ Nan-Iav-CaM සංකීර්ණය), EMD-49848 (ඇෆිඩොපිරොලයින් සහ EDTA සමඟ Nan-Iav-CaM සංකීර්ණය) සහ EMD-49849 (ඇෆිඩොපිරොලයින් සමඟ Nan පෙන්ටමර් සංකීර්ණය). ක්රියාකාරී විශ්ලේෂණය සඳහා අමු දත්ත මෙම පත්රිකාවේ ඉදිරිපත් කර ඇත.
පළ කිරීමේ කාලය: ජනවාරි-28-2026