ඇන්ටෙල්මින්ටික් ඖෂධය N,N-ඩයිඊතයිල්-එම්-ටොලුමයිඩ් (DEET (ඩීට්)) ACHE (ඇසිටිල්කොලීනෙස්ටරේස්) නිෂේධනය කරන බවට වාර්තා වී ඇති අතර අධික සනාලීකරණය හේතුවෙන් පිළිකා කාරක ගුණ ඇත. මෙම පත්‍රිකාවෙන්, DEET විශේෂයෙන් ඇන්ජියෝජෙනසිස් ප්‍රවර්ධනය කරන එන්ඩොතලියල් සෛල උත්තේජනය කරන බවත්, එමඟින් පිළිකා වර්ධනය වැඩි කරන බවත් අපි පෙන්වා දෙමු. DEET ඇන්ජියෝජෙනසිස් වලට තුඩු දෙන සෛලීය ක්‍රියාවලීන් සක්‍රීය කරයි, ප්‍රගුණනය, සංක්‍රමණය සහ ඇලවීම ඇතුළුව. මෙය එන්ඩොතලියල් සෛලවල වැඩිවන NO නිෂ්පාදනය සහ VEGF ප්‍රකාශනය සමඟ සම්බන්ධ වේ. M3 නිශ්ශබ්ද කිරීම හෝ ඖෂධීය M3 නිෂේධක භාවිතා කිරීම මෙම සියලු බලපෑම් අහෝසි කළ අතර, DEET-ප්‍රේරිත ඇන්ජියෝජෙනසිස් M3-සංවේදී බව යෝජනා කරයි. එන්ඩොතලියල් සහ HEK සෛලවල කැල්සියම් සංඥා කිරීම සම්බන්ධ අත්හදා බැලීම් මෙන්ම බන්ධන සහ ඩොකින් අධ්‍යයනයන්, DEET M3 ප්‍රතිග්‍රාහකවල ඇලෝස්ටෙරික් මොඩියුලේටරයක් ලෙස ක්‍රියා කරන බව පෙන්නුම් කරයි. තවද, DEET ACHE නිෂේධනය කරයි, එමඟින් ඇසිටිල්කොලීන් වල ජෛව උපයෝගීතාව සහ M3 ප්‍රතිග්‍රාහක සමඟ එහි බන්ධනය වැඩි කරයි, සහ ඇලෝස්ටෙරික් නියාමනය හරහා ප්‍රෝඇන්ජියෝජනික් බලපෑම් වැඩි දියුණු කරයි.
ප්‍රාථමික ECs ස්විස් මීයන්ගේ aorta වලින් හුදකලා කරන ලදී. නිස්සාරණ ක්‍රමය Kobayashi ප්‍රොටෝකෝලයෙන් අනුවර්තනය කරන ලදී 26. මියුරීන් ECs EBM-2 මාධ්‍යයෙන් 5% තාප-අක්‍රිය FBS සමඟ පරිපූරණය කරන ලද අතර හතරවන ඡේදය දක්වා වගා කරන ලදී.
HUVEC, U87MG, හෝ BF16F10 ප්‍රගුණනය කෙරෙහි DEET සාන්ද්‍රණ දෙකක බලපෑම CyQUANT සෛල ප්‍රගුණන තක්සේරු කට්ටලය (අණුක පරීක්ෂණ, C7026) භාවිතයෙන් විශ්ලේෂණය කරන ලදී. කෙටියෙන් කිවහොත්, ළිඳකට සෛල 5.103 ක් ළිං 96 ක තහඩුවක බීජ කර, එක රැයකින් සවි කිරීමට ඉඩ දී, පසුව පැය 24 ක් DEET සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලදී. වර්ධන මාධ්‍යය ඉවත් කිරීමෙන් පසු, ක්ෂුද්‍ර තහඩුවේ සෑම ළිඳකටම ඩයි බන්ධන ද්‍රාවණයක් එකතු කර විනාඩි 30 ක් 37 °C දී සෛල පුර්ව ලියාපදිංචි කරන්න. 485 nm උද්දීපන පෙරහන් සහ 530 nm විමෝචන පෙරහන් වලින් සමන්විත Mithras LB940 බහුමාධ්‍ය ක්ෂුද්‍ර තහඩු කියවනය (Berthold Technologies, Bad Wildbad, ජර්මනිය) භාවිතයෙන් ප්‍රතිදීප්ත මට්ටම් තීරණය කරන ලදී.
ළිඳකට සෛල 104 ක ඝනත්වයකින් ළිං 96 ක තහඩු වල HUVEC බීජ කරන ලදී. සෛල පැය 24 ක් සඳහා DEET සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලදී. වර්ණමිතික MTT තක්සේරුවක් (සිග්මා-ඇල්ඩ්‍රිච්, M5655) භාවිතයෙන් සෛල ශක්‍යතාව තක්සේරු කරන ලදී. 570 nm තරංග ආයාමයකින් බහුමාධ්‍ය ක්ෂුද්‍ර තහඩු කියවනයක (මිත්‍රාස් LB940) දෘශ්‍ය ඝනත්ව අගයන් ලබා ගන්නා ලදී.
DEET වල බලපෑම් in vitro angiogenesis assays භාවිතයෙන් අධ්‍යයනය කරන ලදී. 10-8 M හෝ 10-5 M DEET සමඟ ප්‍රතිකාර කිරීමෙන් HUVEC වල කේශනාලිකා දිග සෑදීම වැඩි විය (රූපය 1a, b, සුදු තීරු). පාලන කණ්ඩායම හා සසඳන විට, 10-14 සිට 10-5 M දක්වා පරාසයක DEET සාන්ද්‍රණයන් සමඟ ප්‍රතිකාර කිරීමෙන් කේශනාලිකා දිග 10-8 M DEET හි සානුවකට ළඟා වූ බව පෙන්නුම් කළේය (පරිපූරක රූපය S2). 10-8 M සහ 10-5 M සාන්ද්‍රණ පරාසය තුළ DEET සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලද HUVEC වල in vitro proangiogenic බලපෑමේ සැලකිය යුතු වෙනසක් හමු නොවීය.
නව රුධිර වාහිනීකරණය කෙරෙහි DEET වල බලපෑම තීරණය කිරීම සඳහා, අපි සජීවී නව රුධිර වාහිනීකරණ අධ්‍යයනයන් සිදු කළෙමු. දින 14 කට පසු, 10-8 M හෝ 10-5 M DEET සමඟ පූර්ව වගා කරන ලද එන්ඩොතලියල් සෛල එන්නත් කරන ලද මීයන් හිමොග්ලොබින් අන්තර්ගතයේ සැලකිය යුතු වැඩි වීමක් පෙන්නුම් කළේය (රූපය 1c, සුදු තීරු).
තවද, නිරාවරණය වූ මිනිසුන් තුළ සාමාන්‍ය දෙයක් වන 10-5 M ක ප්ලාස්මා සාන්ද්‍රණයක් ඇති කරන මාත්‍රාවකින් DEET සමඟ දිනපතා (ip) එන්නත් කරන ලද U87MG xenograft-දරණ මීයන් තුළ DEET-ප්‍රේරිත නව සනාලකරණය අධ්‍යයනය කරන ලදී. 23 දී. හඳුනාගත හැකි පිළිකා (එනම් පිළිකා > 100 mm3) මීයන්ට U87MG සෛල එන්නත් කිරීමෙන් දින 14 කට පසුව නිරීක්ෂණය කරන ලදී. 28 වන දින, පාලන මීයන් හා සසඳන විට DEET-ප්‍රතිකාර කළ මීයන් තුළ පිළිකා වර්ධනය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි විය (රූපය 1d, වර්ග). තවද, පිළිකා වල CD31 පැල්ලම් කිරීම පෙන්නුම් කළේ DEET කේශනාලිකා ප්‍රදේශය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි කළ නමුත් ක්ෂුද්‍ර වාහිනී ඝනත්වය නොවන බවයි. (රූපය 1e-g).
DETA-ප්‍රේරිත ප්‍රගුණනයේදී මස්කාරිනික් ප්‍රතිග්‍රාහකවල කාර්යභාරය තීරණය කිරීම සඳහා, pFHHSiD (10-7 M, තෝරාගත් M3 ප්‍රතිග්‍රාහක ප්‍රතිවිරෝධකයක්) ඉදිරියේ 10-8 M හෝ 10-5 M DETA භාවිතා කරන ලදී. HUVEC. pFHHSiD ප්‍රතිකාරය සියලුම සාන්ද්‍රණයන්හිදී DETA හි ප්‍රගුණන ගුණාංග සම්පූර්ණයෙන්ම අවහිර කළේය (වගුව 1).
මෙම තත්වයන් යටතේ, DEET මගින් HUVEC සෛලවල කේශනාලිකා දිග වැඩි කරයිද යන්නත් අපි පරීක්ෂා කළෙමු. ඒ හා සමානව, pFHHSiD මගින් DEET-ප්‍රේරිත කේශනාලිකා දිග සැලකිය යුතු ලෙස වළක්වන ලදී (රූපය 1a, b, අළු තීරු). තවද, M3 siRNA සමඟ සමාන අත්හදා බැලීම් සිදු කරන ලදී. කේශනාලිකා සෑදීම ප්‍රවර්ධනය කිරීමේදී පාලන siRNA ඵලදායී නොවූවත්, M3 මස්කාරිනික් ප්‍රතිග්‍රාහකය නිශ්ශබ්ද කිරීම කේශනාලිකා දිග වැඩි කිරීමට DEET හි හැකියාව අහෝසි කළේය (රූපය 1a, b, කළු තීරු).
තවද, 10-8 M හෝ 10-5 M DEET-ප්‍රේරිත සනාලකරණය in vitro සහ neovascularization in vivo යන දෙකම pFHHSiD මගින් සම්පූර්ණයෙන්ම අවහිර කරන ලදී (රූපය 1c, d, කව). මෙම ප්‍රතිඵලවලින් පෙනී යන්නේ DEET තෝරාගත් M3 ප්‍රතිග්‍රාහක ප්‍රතිවිරෝධක හෝ M3 siRNA වලට සංවේදී මාර්ගයක් හරහා ඇන්ජියෝජෙනසිස් ප්‍රවර්ධනය කරන බවයි.
ACHE යනු DEET හි අණුක ඉලක්කයයි. ACHE නිෂේධක ලෙස ක්‍රියා කරන ඩොනෙපෙසිල් වැනි ඖෂධ, විට්‍රෝ තුළ සහ මූසික පසුපස අත් පා ඉෂ්මෙමියා ආකෘතිවල EC ඇන්ජියෝජෙනසිස් උත්තේජනය කළ හැකිය. HUVEC හි ACHE එන්සයිම ක්‍රියාකාරිත්වයට DEET සාන්ද්‍රණ දෙකක බලපෑම අපි පරීක්ෂා කළෙමු. පාලන තත්වයන්ට සාපේක්ෂව DEET හි අඩු (10-8 M) සහ ඉහළ (10-5 M) සාන්ද්‍රණයන් එන්ඩොතලියල් ACHE ක්‍රියාකාරිත්වය අඩු කළේය (රූපය 2).
DEET සාන්ද්‍රණයන් දෙකම (10-8 M සහ 10-5 M) HUVEC මත ඇසිටිල්කොලීනෙස්ටරේස් ක්‍රියාකාරිත්වය අඩු කළේය. ඇසිටිල්කොලීනෙස්ටරේස් නිෂේධක සඳහා පාලනයක් ලෙස BW284c51 (10-5 M) භාවිතා කරන ලදී. වාහන-ප්‍රතිකාර කරන ලද සෛල හා සසඳන විට DEET සාන්ද්‍රණයන් දෙක සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලද HUVEC හි ACHE ක්‍රියාකාරිත්වයේ ප්‍රතිශතයක් ලෙස ප්‍රතිඵල ප්‍රකාශ වේ. ස්වාධීන අත්හදා බැලීම් හයක මධ්‍යන්‍ය ± SEM ලෙස අගයන් ප්‍රකාශ වේ. *p < 0.05 පාලනයට සාපේක්ෂව (Kruskal-Wallis සහ Dunn බහු සංසන්දන පරීක්ෂණය).
නයිට්‍රික් ඔක්සයිඩ් (NO) ඇන්ජියෝජනික් ක්‍රියාවලියට සම්බන්ධ වේ 33, එබැවින්, DEET-උත්තේජිත HUVEC වල NO නිෂ්පාදනය අධ්‍යයනය කරන ලදී. පාලන සෛල හා සසඳන විට DEET-ප්‍රතිකාර කරන ලද එන්ඩොතලියල් NO නිෂ්පාදනය වැඩි වූ නමුත් වැදගත්කමට ළඟා වූයේ 10-8 M මාත්‍රාවකින් පමණි (රූපය 3c). DEET-ප්‍රේරිත NO නිෂ්පාදනය පාලනය කරන අණුක වෙනස්කම් තීරණය කිරීම සඳහා, eNOS ප්‍රකාශනය සහ සක්‍රිය කිරීම බටහිර බ්ලොටින් මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී. DEET ප්‍රතිකාරය eNOS ප්‍රකාශනය වෙනස් නොකළද, එය එහි සක්‍රිය කිරීමේ ස්ථානයේ (Ser-1177) eNOS පොස්පරීකරණය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි කළ අතර eNOS පොස්පරීකරණයේ ප්‍රතිකාර නොකළ සෛල හා සසඳන විට එහි නිෂේධනීය අඩවිය (Thr-495) අඩු කරයි (රූපය 3d). තවද, සක්‍රිය කිරීමේ ස්ථානයේ සහ නිෂේධනීය ස්ථානයේ පොස්පරීකරණය කරන ලද eNOS ප්‍රමාණය මුළු එන්සයිම ප්‍රමාණයට සාමාන්‍යකරණය කිරීමෙන් පසුව ගණනය කරන ලදී. ප්‍රතිකාර නොකළ සෛල හා සසඳන විට DEET හි එක් එක් සාන්ද්‍රණය සමඟ ප්‍රතිකාර කරන ලද HUVEC වල මෙම අනුපාතය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි විය (රූපය 3d).
අවසාන වශයෙන්, ප්‍රධාන ප්‍රෝඇන්ජියෝජනික් සාධකවලින් එකක් වන VEGF හි ප්‍රකාශනය බටහිර බ්ලොටින් මගින් විශ්ලේෂණය කරන ලදී. DEET සැලකිය යුතු ලෙස VEGF ප්‍රකාශනය වැඩි කළ අතර, pFHHSiD මෙම ප්‍රකාශනය සම්පූර්ණයෙන්ම අවහිර කළේය.
DEET වල බලපෑම් ඖෂධීය අවහිරතා සහ M3 ප්‍රතිග්‍රාහක අඩු කිරීමේ නියාමනය යන දෙකටම සංවේදී බැවින්, DEET කැල්සියම් සංඥාකරණය වැඩි දියුණු කළ හැකි බවට උපකල්පනය අපි පරීක්ෂා කළෙමු. පුදුමයට කරුණක් නම්, භාවිතා කරන ලද සාන්ද්‍රණයන් දෙකටම HUVEC (දත්ත පෙන්වා නැත) සහ HEK/M3 (රූපය 4a, b) හි සයිටොප්ලාස්මික් කැල්සියම් වැඩි කිරීමට DEET අසමත් විය.
පළ කිරීමේ කාලය: දෙසැම්බර්-30-2024