ශාන්ත ජෝන් වෝර්ට් වල ජෛව ක්‍රියාකාරී සංයෝග නිෂ්පාදනය සහ අභ්‍යන්තර කාබනික උත්පාදනය කෙරෙහි ශාක වර්ධන නියාමක සහ යකඩ ඔක්සයිඩ් නැනෝ අංශුවල සහයෝගී බලපෑම්.

මෙම අධ්‍යයනයේ දී, ඒකාබද්ධ ප්‍රතිකාරයේ උත්තේජක බලපෑම්ශාක වර්ධන නියාමකයින්*Hypericum perforatum* L. හි විට්‍රෝ රූපජනක හා ද්විතියික පරිවෘත්තීය නිෂ්පාදනය පිළිබඳ (2,4-D සහ kinetin) සහ යකඩ ඔක්සයිඩ් නැනෝ අංශු (Fe₃O₄-NPs) විමර්ශනය කරන ලදී. ප්‍රශස්තකරණය කරන ලද ප්‍රතිකාරය [2,4-D (0.5 mg/L) + kinetin (2 mg/L) + Fe₃O₄-NPs (4 mg/L)] ශාක වර්ධන පරාමිතීන් සැලකිය යුතු ලෙස වැඩිදියුණු කළේය: ශාක උස 59.6% කින්, මූල දිග 114.0% කින්, අංකුර අංකය 180.0% කින් සහ කැලස් නැවුම් බර පාලන කණ්ඩායම හා සසඳන විට 198.3% කින් වැඩි විය. මෙම ඒකාබද්ධ ප්‍රතිකාරය පුනර්ජනන කාර්යක්ෂමතාව (50.85%) වැඩි දියුණු කළ අතර හයිපරිසින් අන්තර්ගතය 66.6% කින් වැඩි කළේය. GC-MS විශ්ලේෂණයෙන් හෙළි වූයේ හයිපරොසයිඩ්, β-පැතොලීන් සහ සෙටයිල් මධ්‍යසාරවල ඉහළ අන්තර්ගතයන් මුළු උච්ච ප්‍රදේශයෙන් 93.36% ක් වන අතර මුළු ෆීනෝලික් සහ ෆ්ලේවනොයිඩ් වල අන්තර්ගතය 80.1% කින් වැඩි වී ඇති බවයි. මෙම ප්‍රතිඵලවලින් පෙනී යන්නේ ශාක වර්ධන නියාමකයින් (PGRs) සහ Fe₃O₄ නැනෝ අංශු (Fe₃O₄-NPs) කාබනික උත්පාදනය සහ ජෛව ක්‍රියාකාරී සංයෝග සමුච්චය කිරීම උත්තේජනය කිරීමෙන් සහජීවන බලපෑමක් ඇති කරන බවයි, එය ඖෂධීය ශාකවල ජෛව තාක්‍ෂණික වැඩිදියුණු කිරීම සඳහා පොරොන්දු වූ උපාය මාර්ගයක් නියෝජනය කරයි.
ශාන්ත ජෝන් වෝර්ට් (හයිපෙරිකම් පර්ෆොරැටම් එල්.), ශාන්ත ජෝන් වෝර්ට් ලෙසද හැඳින්වේ, එය ආර්ථික වටිනාකමක් ඇති හයිපෙරිකේසී පවුලට අයත් බහු වාර්ෂික ශාකසාර ශාකයකි.[1] එහි විභව ජෛව ක්‍රියාකාරී සංරචක අතර ස්වාභාවික ටැනින්, සැන්තෝන්, ෆ්ලෝරොග්ලුසිනෝල්, නැප්තලෙනෙඩියන්ත්‍රෝන් (හයිපරින් සහ ව්‍යාජ හයිපරින්), ෆ්ලේවනොයිඩ්, ෆීනෝලික් අම්ල සහ අත්‍යවශ්‍ය තෙල් ඇතුළත් වේ.[2,3,4] ශාන්ත ජෝන් වෝර්ට් සාම්ප්‍රදායික ක්‍රම මගින් ප්‍රචාරණය කළ හැකිය; කෙසේ වෙතත්, සාම්ප්‍රදායික ක්‍රමවල සෘතුමයභාවය, අඩු බීජ ප්‍රරෝහණය සහ රෝග වලට ගොදුරු වීමේ හැකියාව මහා පරිමාණ වගාව සඳහා සහ ද්විතියික පරිවෘත්තීය අඛණ්ඩව ගොඩනැගීම සඳහා එහි විභවය සීමා කරයි.[1,5,6]
මේ අනුව, ශාක වේගයෙන් ප්‍රචාරණය කිරීම, විෂබීජ ප්ලාස්ම සම්පත් සංරක්ෂණය කිරීම සහ ඖෂධීය සංයෝගවල අස්වැන්න වැඩි කිරීම සඳහා අභ්‍යන්තර පටක වගාව ඵලදායී ක්‍රමයක් ලෙස සැලකේ [7, 8]. ශාක වර්ධන නියාමකයින් (PGRs) රූපජනක ක්‍රියාවලිය නියාමනය කිරීමේදී තීරණාත්මක කාර්යභාරයක් ඉටු කරන අතර කැලස් සහ සම්පූර්ණ ජීවීන්ගේ අභ්‍යන්තර වගාව සඳහා අවශ්‍ය වේ. මෙම සංවර්ධන ක්‍රියාවලීන් සාර්ථකව නිම කිරීම සඳහා ඒවායේ සාන්ද්‍රණයන් සහ සංයෝජන ප්‍රශස්තකරණය ඉතා වැදගත් වේ [9]. එබැවින්, ශාන්ත ජෝන් වෝර්ට් (H. perforatum) [10] හි වර්ධනය සහ පුනර්ජනනීය ධාරිතාව වැඩි දියුණු කිරීම සඳහා නියාමකයින්ගේ සුදුසු සංයුතිය සහ සාන්ද්‍රණය අවබෝධ කර ගැනීම වැදගත් වේ.
යකඩ ඔක්සයිඩ් නැනෝ අංශු (Fe₃O₄) යනු පටක වගාව සඳහා සංවර්ධනය කර ඇති හෝ සංවර්ධනය වෙමින් පවතින නැනෝ අංශු කාණ්ඩයකි. Fe₃O₄ සතුව සැලකිය යුතු චුම්භක ගුණ, හොඳ ජෛව අනුකූලතාව සහ ශාක වර්ධනය ප්‍රවර්ධනය කිරීමේ සහ පාරිසරික ආතතිය අඩු කිරීමේ හැකියාව ඇත, එබැවින් එය පටක වගා සැලසුම් වලදී සැලකිය යුතු අවධානයක් දිනාගෙන ඇත. මෙම නැනෝ අංශුවල විභව යෙදීම් අතර සෛල බෙදීම ප්‍රවර්ධනය කිරීම, පෝෂක අවශෝෂණය වැඩි දියුණු කිරීම සහ ප්‍රතිඔක්සිකාරක එන්සයිම සක්‍රීය කිරීම සඳහා අභ්‍යන්තර සංස්කෘතිය ප්‍රශස්ත කිරීම ඇතුළත් විය හැකිය [11].
නැනෝ අංශු ශාක වර්ධනයට හොඳ ප්‍රවර්ධන බලපෑම් පෙන්නුම් කර ඇතත්, *H. perforatum* හි Fe₃O₄ නැනෝ අංශු සහ ප්‍රශස්ත ශාක වර්ධන නියාමක ඒකාබද්ධව යෙදීම පිළිබඳ අධ්‍යයනයන් තවමත් දුර්ලභ ය. මෙම දැනුම පරතරය පිරවීම සඳහා, මෙම අධ්‍යයනය ඖෂධීය ශාකවල ලක්ෂණ වැඩිදියුණු කිරීම සඳහා නව අවබෝධයක් ලබා දීම සඳහා in vitro morphogenesis සහ ද්විතියික පරිවෘත්තීය නිෂ්පාදනය කෙරෙහි ඒවායේ ඒකාබද්ධ බලපෑම්වල බලපෑම් ඇගයීමට ලක් කළේය. එබැවින්, මෙම අධ්‍යයනයට අරමුණු දෙකක් ඇත: (1) කැලස් සෑදීම, රිකිලි පුනර්ජනනය සහ in vitro තුළ මුල් බැස ගැනීම ඵලදායී ලෙස ප්‍රවර්ධනය කිරීම සඳහා ශාක වර්ධන නියාමක සාන්ද්‍රණය ප්‍රශස්ත කිරීම; සහ (2) in vitro තුළ වර්ධන පරාමිතීන් මත Fe₃O₄ නැනෝ අංශුවල බලපෑම් ඇගයීම. අනාගත සැලසුම් අතරට හුරුවීමේදී (in vitro) පුනර්ජනනය වූ ශාකවල පැවැත්මේ අනුපාතය ඇගයීම ඇතුළත් වේ. මෙම අධ්‍යයනයේ ප්‍රතිඵලවලට *H. perforatum* හි ක්ෂුද්‍ර ප්‍රචාරණ කාර්යක්ෂමතාව සැලකිය යුතු ලෙස වැඩිදියුණු කරනු ඇතැයි අපේක්ෂා කෙරේ, එමඟින් මෙම වැදගත් ඖෂධීය ශාකයේ තිරසාර භාවිතය සහ ජෛව තාක්‍ෂණික යෙදීම් සඳහා දායක වේ.
මෙම අධ්‍යයනයේ දී, අපි ක්ෂේත්‍රයේ වගා කරන ලද වාර්ෂික ශාන්ත ජෝන් වෝර්ට් ශාක (මව් ශාක) වලින් කොළ නිස්සාරණ ලබා ගත්තෙමු. මෙම නිස්සාරණ ඉන් විට්‍රෝ වගා තත්වයන් ප්‍රශස්ත කිරීම සඳහා භාවිතා කරන ලදී. වගා කිරීමට පෙර, කොළ මිනිත්තු කිහිපයක් ගලා යන ආසවනය කළ ජලය යටතේ හොඳින් සේදිය යුතුය. ඉන්පසු නිස්සාරණ මතුපිට තත්පර 30 ක් 70% එතනෝල් වල ගිල්වීමෙන් විෂබීජහරණය කරන ලද අතර, පසුව ට්වීන් 20 බිංදු කිහිපයක් අඩංගු 1.5% සෝඩියම් හයිපොක්ලෝරයිට් (NaOCl) ද්‍රාවණයක විනාඩි 10 ක් ගිල්වා ඇත. අවසාන වශයෙන්, ඊළඟ සංස්කෘතික මාධ්‍යයට මාරු කිරීමට පෙර නිස්සාරණ නිසරු ආසවනය කළ ජලයෙන් තුන් වරක් සේදිය යුතුය.
ඉදිරි සති හතර තුළ, රිකිලි පුනර්ජනන පරාමිතීන් මනින ලදී, පුනර්ජනන අනුපාතය, එක් එක් රිකිලි අංකුර ගණන සහ එක් එක් රිකිලි දිග ඇතුළුව. පුනර්ජනනය කරන ලද රිකිලි අවම වශයෙන් සෙන්ටිමීටර 2 ක දිගකට ළඟා වූ විට, ඒවා අර්ධ-ශක්ති MS මාධ්‍යය, 0.5 mg/L ඉන්ඩොලෙබියුට්රික් අම්ලය (IBA) සහ 0.3% ගුවාර් ගම් වලින් සමන්විත මුල් බැස ගැනීමේ මාධ්‍යයකට මාරු කරන ලදී. මුල් බැස ගැනීමේ සංස්කෘතිය සති තුනක් පැවතුන අතර, එම කාලය තුළ මුල් බැස ගැනීමේ අනුපාතය, මූල අංකය සහ මුල් දිග මනිනු ලැබීය. සෑම ප්‍රතිකාරයක්ම තුන් වරක් පුනරාවර්තනය කරන ලද අතර, එක් එක් රිකිලි සඳහා රිකිලි 10 ක් වගා කරන ලද අතර, එක් ප්‍රතිකාරයකට ආසන්න වශයෙන් 30 ක් ලබා දෙන ලදී.
ශාකයේ උස සෙන්ටිමීටර (සෙ.මී.) වලින්, ශාකයේ පාදයේ සිට උසම පත්‍රයේ කෙළවර දක්වා, පාලකයක් භාවිතා කර මනිනු ලැබීය. බීජ පැල ප්‍රවේශමෙන් ඉවත් කර වැඩෙන මාධ්‍යය ඉවත් කළ වහාම මුල් දිග මිලිමීටර (මි.මී.) වලින් මනිනු ලැබීය. එක් එක් ශාකය මත එක් එක් ශාකය මත අංකුර ගණන කෙලින්ම ගණනය කරන ලදී. ගැටිති ලෙස හැඳින්වෙන කොළ මත ඇති කළු ලප ගණන දෘශ්‍යමය වශයෙන් මනිනු ලැබීය. මෙම කළු ගැටිති හයිපරිසින් හෝ ඔක්සිකාරක ලප අඩංගු ග්‍රන්ථි ලෙස විශ්වාස කරන අතර, ප්‍රතිකාර සඳහා ශාකයේ ප්‍රතිචාරයේ භෞතික විද්‍යාත්මක දර්ශකයක් ලෙස භාවිතා කරයි. සියලුම වැඩෙන මාධ්‍ය ඉවත් කිරීමෙන් පසු, බීජ පැලවල නැවුම් බර මිලිග්‍රෑම් (mg) නිරවද්‍යතාවයකින් ඉලෙක්ට්‍රොනික පරිමාණයක් භාවිතයෙන් මනිනු ලැබීය.
කැලස් සෑදීමේ වේගය ගණනය කිරීමේ ක්‍රමය පහත පරිදි වේ: විවිධ වර්ධන නියාමකයින් (කයිනේස්, 2,4-D, සහ Fe3O4) අඩංගු මාධ්‍යයක සති හතරක් පුරාවට එක්ස්ප්ලාන්ට් වගා කිරීමෙන් පසු, කැලස් සෑදීමට හැකියාව ඇති එක්ස්ප්ලාන්ට් ගණන ගණනය කෙරේ. කැලස් සෑදීමේ වේගය ගණනය කිරීමේ සූත්‍රය පහත පරිදි වේ:
සෑම ප්‍රතිකාරයක්ම තුන් වරක් පුනරාවර්තනය කරන ලද අතර, සෑම පුනරාවර්තනයකදීම අවම වශයෙන් එක්ස්ප්ලාන්ට් 10 ක් පරීක්ෂා කරන ලදී.
පුනර්ජනන අනුපාතය මගින් කැලස් සෑදීමේ අවධියෙන් පසු අංකුර අවකලනය කිරීමේ ක්‍රියාවලිය සාර්ථකව සම්පූර්ණ කරන කැලස් පටක අනුපාතය පිළිබිඹු වේ. මෙම දර්ශකය මගින් කැලස් පටක වලට වෙනස් පටක බවට පරිවර්තනය වී නව ශාක අවයව බවට වර්ධනය වීමේ හැකියාව පෙන්නුම් කරයි.
මුල් බැස ගැනීමේ සංගුණකය යනු මුල් බැස ගත හැකි අතු සංඛ්‍යාවේ මුළු අතු සංඛ්‍යාවට අනුපාතයයි. මෙම දර්ශකය මුල් බැස ගැනීමේ අවධියේ සාර්ථකත්වය පිළිබිඹු කරයි, එය ක්ෂුද්‍ර ප්‍රචාරණය සහ ශාක ප්‍රචාරණය සඳහා ඉතා වැදගත් වේ, මන්ද හොඳ මුල් බැස ගැනීම වර්ධනය වන තත්වයන් තුළ බීජ පැල වඩා හොඳින් නොනැසී පැවතීමට උපකාරී වේ.
හයිපරිසින් සංයෝග 90% මෙතනෝල් සමඟ නිස්සාරණය කරන ලදී. වියළි ශාක ද්‍රව්‍ය මිලිග්‍රෑම් පනහක් මෙතනෝල් මිලි ලීටර් 1 කට එකතු කර අඳුරේ කාමර උෂ්ණත්වයේ දී අතිධ්වනික පිරිසිදුකාරකයක (ආකෘතිය A5120-3YJ) 30 kHz දී මිනිත්තු 20 ක් සඳහා සොනිකේෂන් කරන ලදී. සොනිකේෂන් කිරීමෙන් පසු, සාම්පලය විනාඩි 15 ක් සඳහා 6000 rpm හි කේන්ද්‍රාපසාරී කරන ලදී. සුපිරි ද්‍රව්‍යය එකතු කරන ලද අතර, කොන්සෙයිසාඕ සහ වෙනත් අය විසින් විස්තර කරන ලද ක්‍රමයට අනුව ප්ලස්-3000 S වර්ණාවලීක්ෂ ඡායාරූපමානයක් භාවිතයෙන් හයිපරිසින් අවශෝෂණය 592 nm දී මනිනු ලැබීය. [14].
ශාක වර්ධන නියාමකයින් (PGRs) සහ යකඩ ඔක්සයිඩ් නැනෝ අංශු (Fe₃O₄-NPs) සමඟ කරන ලද බොහෝ ප්‍රතිකාර මගින් පුනර්ජනනීය අංකුර කොළ මත කළු ගැටිති සෑදීමට හේතු නොවීය. 0.5 හෝ 1 mg/L 2,4-D, 0.5 හෝ 1 mg/L කයිනෙටින්, හෝ 1, 2, හෝ 4 mg/L යකඩ ඔක්සයිඩ් නැනෝ අංශු සහිත කිසිදු ප්‍රතිකාරයක ගැටිති නිරීක්ෂණය නොවීය. කයිනෙටින් සහ/හෝ යකඩ ඔක්සයිඩ් නැනෝ අංශුවල ඉහළ සාන්ද්‍රණයකදී ගැටිති වර්ධනයේ සුළු වැඩිවීමක් (නමුත් සංඛ්‍යානමය වශයෙන් වැදගත් නොවේ) සංයෝජන කිහිපයක් පෙන්නුම් කළේය, එනම් කයිනෙටින් (1–1.5 mg/L) සහ යකඩ ඔක්සයිඩ් නැනෝ අංශු (2–4 mg/L) සමඟ 2,4-D (0.5–2 mg/L) සංයෝජනය කිරීම. මෙම ප්‍රතිඵල රූපය 2 හි දක්වා ඇත. කළු ගැටිති හයිපෙරිසින් බහුල ග්‍රන්ථි නියෝජනය කරන අතර ඒවා ස්වභාවිකව සිදුවන සහ ප්‍රයෝජනවත් වේ. මෙම අධ්‍යයනයේ දී, කළු ගැටිති ප්‍රධාන වශයෙන් පටක දුඹුරු පැහැ ගැන්වීම සමඟ සම්බන්ධ වී ඇති අතර, එය හයිපෙරිසින් සමුච්චය සඳහා හිතකර පරිසරයක් පෙන්නුම් කරයි. 2,4-D, කයිනෙටින් සහ Fe₃O₄ නැනෝ අංශු සමඟ ප්‍රතිකාර කිරීම මගින් කැලස් වර්ධනය, දුඹුරු පැහැය අඩු කිරීම සහ ක්ලෝරෝෆිල් අන්තර්ගතය වැඩි කිරීම ප්‍රවර්ධනය කරන ලද අතර, පරිවෘත්තීය ක්‍රියාකාරිත්වය වැඩිදියුණු කිරීම සහ ඔක්සිකාරක හානිය අඩු කිරීමේ විභවය යෝජනා කරයි [37]. මෙම අධ්‍යයනයෙන් 2,4-D සහ Fe₃O₄ නැනෝ අංශු සමඟ ඒකාබද්ධව කයිනෙටින් වල බලපෑම ශාන්ත ජෝන් වෝර්ට් කැලස් වල වර්ධනය හා සංවර්ධනය කෙරෙහි ඇගයීමට ලක් කරන ලදී (රූපය 3a-g). පෙර අධ්‍යයනයන් පෙන්වා දී ඇත්තේ Fe₃O₄ නැනෝ අංශු වලට දිලීර නාශක සහ ප්‍රති-ක්ෂුද්‍ර ජීවී ක්‍රියාකාරකම් ඇති බවත්, ශාක වර්ධන නියාමකයින් සමඟ ඒකාබද්ධව භාවිතා කරන විට, ශාක ආරක්ෂක යාන්ත්‍රණයන් උත්තේජනය කළ හැකි බවත් සෛලීය ආතති දර්ශක අඩු කළ හැකි බවත්ය [38]. ද්විතියික පරිවෘත්තීය ද්‍රව්‍යවල ජෛව සංස්ලේෂණය ජානමය වශයෙන් නියාමනය කර ඇතත්, ඒවායේ සැබෑ අස්වැන්න පාරිසරික තත්ත්වයන් මත බෙහෙවින් රඳා පවතී. පරිවෘත්තීය සහ රූප විද්‍යාත්මක වෙනස්කම් නිශ්චිත ශාක ජානවල ප්‍රකාශනය නියාමනය කිරීමෙන් සහ පාරිසරික සාධකවලට ප්‍රතිචාර දැක්වීමෙන් ද්විතියික පරිවෘත්තීය මට්ටම්වලට බලපෑම් කළ හැකිය. තවද, ප්‍රේරක මඟින් නව ජාන සක්‍රිය කිරීම අවුලුවාලිය හැකි අතර, එමඟින් එන්සයිම ක්‍රියාකාරිත්වය උත්තේජනය වන අතර, අවසානයේ බහු ජෛව සංස්ලේෂණ මාර්ග සක්‍රීය කර ද්විතියික පරිවෘත්තීය සෑදීමට මග පාදයි. තවද, තවත් අධ්‍යයනයකින් පෙන්නුම් කළේ සෙවන අඩු කිරීම හිරු එළියට නිරාවරණය වීම වැඩි කරන බවත්, එමඟින් *හයිපෙරිකම් පර්ෆොරටම්* හි ස්වාභාවික වාසස්ථානවල දිවා කාලයේ උෂ්ණත්වය ඉහළ යන බවත්, එය හයිපරිසින් අස්වැන්න වැඩි කිරීමට ද දායක වන බවත්ය. මෙම දත්ත මත පදනම්ව, මෙම අධ්‍යයනයෙන් පටක සංස්කෘතියේ විභව ප්‍රේරක ලෙස යකඩ නැනෝ අංශුවල භූමිකාව විමර්ශනය කරන ලදී. ප්‍රතිඵලවලින් පෙනී ගියේ මෙම නැනෝ අංශු එන්සයිම උත්තේජනය හරහා හෙස්පෙරිඩින් ජෛව සංස්ලේෂණයට සම්බන්ධ ජාන සක්‍රිය කළ හැකි බවත්, එමඟින් මෙම සංයෝගයේ සමුච්චය වැඩි වීමට හේතු වන බවත්ය (රූපය 2). එමනිසා, ස්වාභාවික තත්වයන් යටතේ වැඩෙන ශාක හා සසඳන විට, මධ්‍යස්ථ ආතතිය ද්විතියික පරිවෘත්තීය ජෛව සංස්ලේෂණයට සම්බන්ධ ජාන සක්‍රිය කිරීම සමඟ ඒකාබද්ධ වූ විට එවැනි සංයෝග නිෂ්පාදනය ද වැඩි දියුණු කළ හැකි බව තර්ක කළ හැකිය. ඒකාබද්ධ ප්‍රතිකාර සාමාන්‍යයෙන් පුනර්ජනන අනුපාතයට ධනාත්මක බලපෑමක් ඇති කරයි, නමුත් සමහර අවස්ථාවල මෙම බලපෑම දුර්වල වේ. විශේෂයෙන්, 1 mg/L 2,4-D, 1.5 mg/L කයිනේස් සහ විවිධ සාන්ද්‍රණයන් සමඟ ප්‍රතිකාර කිරීමෙන් පාලන කණ්ඩායමට සාපේක්ෂව පුනර්ජනන අනුපාතය ස්වාධීනව සහ සැලකිය යුතු ලෙස 50.85% කින් වැඩි කළ හැකිය (රූපය 4c). මෙම ප්‍රතිඵලවලින් පෙනී යන්නේ නැනෝ හෝමෝනවල නිශ්චිත සංයෝජන ශාක වර්ධනය සහ පරිවෘත්තීය නිෂ්පාදනය ප්‍රවර්ධනය කිරීම සඳහා සහජීවනයෙන් ක්‍රියා කළ හැකි බවයි, එය ඖෂධීය ශාකවල පටක සංස්කෘතිය සඳහා ඉතා වැදගත් වේ. පාමර් සහ කෙලර් [50] පෙන්වා දුන්නේ 2,4-D ප්‍රතිකාරය ස්වාධීනව ශාන්ත පර්ෆෝරටම් හි කැලස් සෑදීම ඇති කළ හැකි බවත්, කයිනේස් එකතු කිරීම කැලස් සෑදීම සහ පුනර්ජනනය සැලකිය යුතු ලෙස වැඩි දියුණු කළ බවත්ය. මෙම බලපෑම හෝමෝන සමතුලිතතාවය වැඩිදියුණු කිරීම සහ සෛල බෙදීම උත්තේජනය කිරීම නිසා ඇති වූ බවයි. බෝල් සහ වෙනත් අය [51] සොයා ගත්තේ Fe₃O₄-NP ප්‍රතිකාරය ප්‍රතිඔක්සිකාරක එන්සයිමවල ක්‍රියාකාරිත්වය ස්වාධීනව වැඩි දියුණු කළ හැකි බවත්, එමඟින් ශාන්ත පර්ෆෝරටම් හි මූල වර්ධනය ප්‍රවර්ධනය කළ හැකි බවත්ය. 0.5 mg/L, 1 mg/L සහ 1.5 mg/L සාන්ද්‍රණයකින් Fe₃O₄ නැනෝ අංශු අඩංගු සංස්කෘතික මාධ්‍ය හණ ශාකවල පුනර්ජනන අනුපාතය වැඩි දියුණු කළේය [52]. කයිනෙටින්, 2,4-ඩයික්ලෝරොබෙන්සෝතියසොලිනෝන් සහ Fe₃O₄ නැනෝ අංශු භාවිතය කැල්ලස් සහ මුල් සෑදීමේ අනුපාත සැලකිය යුතු ලෙස වැඩිදියුණු කළ නමුත්, මෙම හෝමෝන අභ්‍යන්තර පුනර්ජනනය සඳහා භාවිතා කිරීමේ විභව අතුරු ආබාධ සලකා බැලිය යුතුය. නිදසුනක් ලෙස, 2,4-ඩයික්ලෝරොබෙන්සෝතියසොලිනෝන් හෝ කයිනෙටින් දිගු කාලීනව හෝ ඉහළ සාන්ද්‍රණයකින් භාවිතා කිරීමෙන් සොමැටික් ක්ලෝනල් විචලනය, ඔක්සිකාරක ආතතිය, අසාමාන්‍ය කැල්ලස් රූප විද්‍යාව හෝ විට්‍රිෆිකේෂන් ඇති විය හැක. එබැවින්, ඉහළ පුනර්ජනන අනුපාතයක් අනිවාර්යයෙන්ම ජානමය ස්ථායිතාව පුරෝකථනය නොකරයි. සියලුම පුනර්ජනනීය ශාක අණුක සලකුණු (උදා: RAPD, ISSR, AFLP) හෝ සයිටොජෙනටික් විශ්ලේෂණය භාවිතයෙන් තක්සේරු කළ යුතු අතර ඒවායේ සමජාතීයතාවය සහ in vivo ශාක වලට සමානකම තීරණය කළ යුතුය [53,54,55].
මෙම අධ්‍යයනයෙන් ප්‍රථම වරට පෙන්නුම් කළේ ශාක වර්ධන නියාමකයින් (2,4-D සහ කයිනෙටින්) Fe₃O₄ නැනෝ අංශු සමඟ ඒකාබද්ධව භාවිතා කිරීමෙන් *හයිපෙරිකම් පර්ෆොරටම්* හි රූපජනක හා ප්‍රධාන ජෛව ක්‍රියාකාරී පරිවෘත්තීය (හයිපරිසින් සහ හයිපරොසයිඩ් ඇතුළුව) සමුච්චය වීම වැඩි දියුණු කළ හැකි බවයි. ප්‍රශස්ත ප්‍රතිකාර ක්‍රමය (1 mg/L 2,4-D + 1 mg/L කයිනෙටින් + 4 mg/L Fe₃O₄-NPs) කැල්ලස් සෑදීම, කාබනික ජනනය සහ ද්විතියික පරිවෘත්තීය අස්වැන්න උපරිම කිරීම පමණක් නොව, මෘදු ප්‍රේරක බලපෑමක් ද පෙන්නුම් කළ අතර, ශාකයේ ආතති ඉවසීම සහ ඖෂධීය වටිනාකම වැඩි දියුණු කළ හැකිය. නැනෝ තාක්‍ෂණය සහ ශාක පටක සංස්කෘතියේ සංයෝජනය ඖෂධීය සංයෝග විශාල පරිමාණයෙන් විට්‍රෝ නිෂ්පාදනය සඳහා තිරසාර හා කාර්යක්ෂම වේදිකාවක් සපයයි. මෙම ප්‍රතිඵල කාර්මික යෙදුම් සහ අණුක යාන්ත්‍රණ, මාත්‍රා ප්‍රශස්තිකරණය සහ ජානමය නිරවද්‍යතාවය පිළිබඳ අනාගත පර්යේෂණ සඳහා මග පාදයි, එමඟින් ඖෂධීය ශාක පිළිබඳ මූලික පර්යේෂණ ප්‍රායෝගික ජෛව තාක්‍ෂණය සමඟ සම්බන්ධ කරයි.