කුඩා ජලජ ඉස්‌ගෙඩියන් සඳහා වාණිජ සයිපර්මෙත්‍රින් සූදානමේ මරණ අනුපාතය සහ විෂ වීම.

මෙම අධ්‍යයනයෙන් වාණිජමය ද්‍රව්‍යවල මාරාන්තික බව, උපමානුපාතික බව සහ විෂ සහිත බව තක්සේරු කරන ලදී.සයිපර්මෙත්‍රින්අනුරන් ටැඩ්පෝල් සඳහා සූත්‍රගත කිරීම්. උග්‍ර පරීක්ෂණයේදී, පැය 96ක් සඳහා 100–800 μg/L සාන්ද්‍රණයන් පරීක්ෂා කරන ලදී. නිදන්ගත පරීක්ෂණයේදී, ස්වභාවිකව ඇති වන සයිපර්මෙත්‍රින් සාන්ද්‍රණයන් (1, 3, 6, සහ 20 μg/L) මරණ සඳහා පරීක්ෂා කරන ලද අතර, පසුව ක්ෂුද්‍ර න්‍යෂ්ටික පරීක්ෂණ සහ රතු රුධිර සෛල න්‍යෂ්ටික අසාමාන්‍යතා දින 7ක් සඳහා සිදු කරන ලදී. ටැඩ්පෝල් සඳහා වාණිජ සයිපර්මෙත්‍රින් සූත්‍රගත කිරීමේ LC50 273.41 μg L−1 විය. නිදන්ගත පරීක්ෂණයේදී, ඉහළම සාන්ද්‍රණය (20 μg L−1) 50%කට වඩා වැඩි මරණ සංඛ්‍යාවක් ඇති කළ අතර, එය පරීක්ෂා කරන ලද ටැඩ්පෝල් වලින් අඩක් මරා දැමීය. ක්ෂුද්‍ර න්‍යෂ්ටික පරීක්ෂණය 6 සහ 20 μg L−1 හි සැලකිය යුතු ප්‍රතිඵල පෙන්නුම් කළ අතර න්‍යෂ්ටික අසාමාන්‍යතා කිහිපයක් අනාවරණය විය, එයින් පෙන්නුම් කරන්නේ වාණිජ සයිපර්මෙත්‍රින් සූත්‍රගත කිරීම P. ග්‍රැසිලිස්ට එරෙහිව ජෙනෝටොක්සික් විභවයක් ඇති බවයි. සයිපර්මෙත්‍රින් මෙම විශේෂයට ඉහළ අවදානමක් ඇති කරන අතර, එයින් පෙන්නුම් කරන්නේ එය කෙටි කාලීනව සහ දිගු කාලීනව මෙම පරිසර පද්ධතියේ ගතිකත්වයට බලපාන සහ බහුවිධ ගැටළු ඇති කළ හැකි බවයි. එබැවින්, වාණිජ සයිපර්මෙත්‍රින් සංයෝග P. ග්‍රැසිලිස් මත විෂ සහිත බලපෑම් ඇති කරන බව නිගමනය කළ හැකිය.
කෘෂිකාර්මික කටයුතු අඛණ්ඩව ව්‍යාප්ත වීම සහ දැඩි ලෙස යෙදීම හේතුවෙන්පළිබෝධ පාලනයපියවරයන් අනුව, ජලජ සතුන් නිතර පළිබෝධනාශකවලට නිරාවරණය වේ1,2. කෘෂිකාර්මික ක්ෂේත්‍ර අසල ජල සම්පත් දූෂණය වීම උභයජීවීන් වැනි ඉලක්කගත නොවන ජීවීන්ගේ වර්ධනයට සහ පැවැත්මට බලපෑ හැකිය.
පාරිසරික අනුකෘති තක්සේරු කිරීමේදී උභයජීවීන් වඩ වඩාත් වැදගත් වෙමින් පවතී. සංකීර්ණ ජීවන චක්‍ර, වේගවත් කීට වර්ධන අනුපාත, කුසලාන තත්ත්වය, පාරගම්ය සම10,11, ප්‍රජනනය සඳහා ජලය මත යැපීම12 සහ අනාරක්ෂිත බිත්තර11,13,14 වැනි අද්විතීය ලක්ෂණ නිසා අනුරන්ස් පරිසර දූෂකවල හොඳ ජෛව දර්ශක ලෙස සැලකේ. සාමාන්‍යයෙන් අඬන ගෙම්බා ලෙස හඳුන්වන කුඩා ජල ගෙම්බා (Physalaemus gracilis), පළිබෝධනාශක දූෂණයේ ජෛව දර්ශක විශේෂයක් ලෙස පෙන්වා දී ඇත4,5,6,7,15. මෙම විශේෂය ආර්ජන්ටිනාව, උරුගුවේ, පැරගුවේ සහ බ්‍රසීලයේ ස්ථාවර ජලයේ, ආරක්ෂිත ප්‍රදේශවල හෝ විචල්‍ය වාසස්ථාන සහිත ප්‍රදේශවල දක්නට ලැබෙන අතර විවිධ වාසස්ථානවල පුළුල් ව්‍යාප්තිය සහ ඉවසීම හේතුවෙන් IUCN වර්ගීකරණය මගින් ස්ථාවර ලෙස සැලකේ18.
සයිපර්මෙත්‍රින් වලට නිරාවරණය වීමෙන් පසු උභයජීවීන් තුළ උපමාරක බලපෑම් වාර්තා වී ඇති අතර, ටැඩ්පෝල් වල හැසිරීම්, රූප විද්‍යාත්මක සහ ජෛව රසායනික වෙනස්කම් 23,24,25, වෙනස් වූ මරණ සහ පරිවෘත්තීය කාලය, එන්සයිම වෙනස්කම්, පැටවුන් බිහිවීමේ සාර්ථකත්වය අඩුවීම 24,25, අධි ක්‍රියාකාරීත්වය 26, කොලිනෙස්ටරේස් ක්‍රියාකාරිත්වය නිෂේධනය කිරීම 27 සහ පිහිනුම් ක්‍රියාකාරිත්වයේ වෙනස්කම් 7,28 ඇතුළත් වේ. කෙසේ වෙතත්, උභයජීවීන් තුළ සයිපර්මෙත්‍රින් වල ජානමය විෂ සහිත බලපෑම් පිළිබඳ අධ්‍යයනයන් සීමිතය. එබැවින්, අනුරන් විශේෂවල සයිපර්මෙත්‍රින් වලට ඇති සංවේදීතාව තක්සේරු කිරීම වැදගත් වේ.
පරිසර දූෂණය උභයජීවීන්ගේ සාමාන්‍ය වර්ධනයට හා වර්ධනයට බලපාන නමුත්, වඩාත්ම බරපතල අහිතකර බලපෑම වන්නේ පළිබෝධනාශකවලට නිරාවරණය වීමෙන් DNA වලට සිදුවන ජානමය හානියයි13. රුධිර සෛල රූප විද්‍යාත්මක විශ්ලේෂණය දූෂණය සහ වල් විශේෂවලට ද්‍රව්‍යයක විභව විෂ වීම පිළිබඳ වැදගත් ජෛව දර්ශකයකි29. ක්ෂුද්‍ර න්‍යෂ්ටික පරීක්ෂණය පරිසරයේ රසායනික ද්‍රව්‍යවල ජානමය විෂ බව තීරණය කිරීම සඳහා බහුලව භාවිතා වන ක්‍රමවලින් එකකි30. එය උභයජීවීන් වැනි ජීවීන්ගේ රසායනික දූෂණය පිළිබඳ හොඳ දර්ශකයක් වන වේගවත්, ඵලදායී සහ මිල අඩු ක්‍රමයක් වන අතර ජානමය විෂ දූෂකවලට නිරාවරණය වීම පිළිබඳ තොරතුරු සැපයිය හැකිය33.
මෙම අධ්‍යයනයේ අරමුණ වූයේ ක්ෂුද්‍ර න්‍යෂ්ටික පරීක්ෂණයක් සහ පාරිසරික අවදානම් තක්සේරුවක් භාවිතා කරමින් වාණිජ සයිපර්මෙත්‍රින් සූත්‍රවල කුඩා ජලජ ඉස්‌ගෙඩියන් සඳහා විෂ සහිත විභවය තක්සේරු කිරීමයි.
පරීක්ෂණයේ උග්‍ර කාල පරිච්ඡේදය තුළ වාණිජ සයිපර්මෙත්‍රින් වල විවිධ සාන්ද්‍රණයන්ට නිරාවරණය වූ P. ග්‍රැසිලිස් ටැඩ්පෝල් වල සමුච්චිත මරණ අනුපාතය (%).
නිදන්ගත පරීක්ෂණයකදී වාණිජ සයිපර්මෙත්‍රින් වල විවිධ සාන්ද්‍රණයන්ට නිරාවරණය වූ P. ග්‍රැසිලිස් ටැඩ්පෝල් වල සමුච්චිත මරණ අනුපාතය (%).
නිරීක්ෂණය කරන ලද ඉහළ මරණ අනුපාතය, විවිධ සාන්ද්‍රණයන් වන සයිපර්මෙත්‍රින් (6 සහ 20 μg/L) වලට නිරාවරණය වන උභයජීවීන් තුළ ජාන විෂ සහිත බලපෑම් හේතුවෙන් ඇති වූ අතර, ක්ෂුද්‍ර න්‍යෂ්ටීන් (MN) සහ එරිත්‍රෝසයිට් වල න්‍යෂ්ටික අසාමාන්‍යතා පැවතීම මගින් පෙන්නුම් කෙරේ. MN සෑදීම මයිටෝසිස් වල දෝෂ පෙන්නුම් කරන අතර එය ක්ෂුද්‍ර නල වලට වර්ණදේහ දුර්වල ලෙස බන්ධනය වීම, වර්ණදේහ අවශෝෂණය සහ ප්‍රවාහනය සඳහා වගකිව යුතු ප්‍රෝටීන් සංකීර්ණවල දෝෂ, වර්ණදේහ වෙන් කිරීමේ දෝෂ සහ DNA හානි අලුත්වැඩියා කිරීමේ දෝෂ සමඟ සම්බන්ධ විය හැකිය38,39 සහ පළිබෝධනාශක මගින් ඇති කරන ලද ඔක්සිකාරක ආතතියට සම්බන්ධ විය හැකිය40,41. ඇගයීමට ලක් කරන ලද සියලුම සාන්ද්‍රණයන්හිදී අනෙකුත් අසාමාන්‍යතා නිරීක්ෂණය විය. සයිපර්මෙත්‍රින් සාන්ද්‍රණය වැඩි වීම නිසා අවම (1 μg/L) සහ ඉහළම (20 μg/L) මාත්‍රාවලදී පිළිවෙලින් 5% සහ 20% කින් එරිත්‍රෝසයිට් වල න්‍යෂ්ටික අසාමාන්‍යතා වැඩි විය. උදාහරණයක් ලෙස, විශේෂයක DNA වල වෙනස්කම් කෙටි කාලීන සහ දිගු කාලීන පැවැත්ම සඳහා බරපතල ප්‍රතිවිපාක ඇති කළ හැකි අතර, එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස ජනගහන අඩුවීම, වෙනස් වූ ප්‍රජනන යෝග්‍යතාවය, අභිජනනය, ජාන විවිධත්වය නැතිවීම සහ වෙනස් වූ සංක්‍රමණ අනුපාත ඇති විය හැක. මෙම සියලු සාධක විශේෂ පැවැත්මට සහ නඩත්තුවට බලපෑම් කළ හැකිය42,43. එරිත්‍රොයිඩ් අසාමාන්‍යතා ඇතිවීම සයිටොකීනයිසිස් අවහිර වීමක් පෙන්නුම් කළ හැකි අතර, එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස අසාමාන්‍ය සෛල බෙදීම (ද්වි න්‍යෂ්ටික එරිත්‍රෝසයිට්)44,45; බහු-ලොබ් න්‍යෂ්ටි යනු බහු පෙති සහිත න්‍යෂ්ටික පටලයේ නෙරා යාමකි46, අනෙකුත් එරිත්‍රොයිඩ් අසාමාන්‍යතා DNA විස්තාරණය සමඟ සම්බන්ධ විය හැකිය, එනම් න්‍යෂ්ටික වකුගඩු/බ්ලෙබ්47. න්‍යෂ්ටික එරිත්‍රෝසයිට් තිබීම, විශේෂයෙන් දූෂිත ජලයේ, ඔක්සිජන් ප්‍රවාහනය අඩපණ වීම පෙන්නුම් කළ හැකිය48,49. ඇපොප්ටෝසිස් සෛල මරණය පෙන්නුම් කරයි50.
අනෙකුත් අධ්‍යයනයන් මගින් සයිපර්මෙත්‍රින් වල ජාන විෂ සහිත බලපෑම් ද පෙන්නුම් කර ඇත. කබනා සහ තවත් අය.51, සයිපර්මෙත්‍රින් (5000 සහ 10,000 μg L−1) ඉහළ සාන්ද්‍රණයකට පැය 96ක් නිරාවරණය වීමෙන් පසු ඔඩොන්ටොෆ්‍රිනස් ඇමරිකානස් සෛලවල ද්වි න්‍යෂ්ටික සෛල සහ ඇපොප්ටෝටික් සෛල වැනි ක්ෂුද්‍ර න්‍යෂ්ටික සහ න්‍යෂ්ටික වෙනස්කම් පවතින බව පෙන්නුම් කළහ. P. biligonigerus52 සහ Rhinella arenarum53 හි ද සයිපර්මෙත්‍රින්-ප්‍රේරිත ඇපොප්ටෝසිස් අනාවරණය විය. මෙම ප්‍රතිඵලවලින් පෙනී යන්නේ සයිපර්මෙත්‍රින් ජලජ ජීවීන් පරාසයකට ජාන විෂ සහිත බලපෑම් ඇති බවත් MN සහ ENA විශ්ලේෂණය උභයජීවීන්ට උපමාරක බලපෑම් පිළිබඳ දර්ශකයක් විය හැකි බවත් එය දේශීය විශේෂ සහ විෂ ද්‍රව්‍යවලට නිරාවරණය වන වල් ජනගහනයට අදාළ විය හැකි බවත්ය.
සයිපර්මෙත්‍රින් හි වාණිජමය සංයෝග ඉහළ පාරිසරික අනතුරක් (උග්‍ර සහ නිදන්ගත යන දෙකම) ඇති කරයි, මූලස්ථාන එක්සත් ජනපද පාරිසරික ආරක්ෂණ ඒජන්සියේ (EPA) මට්ටම ඉක්මවා යන අතර පරිසරයේ පවතී නම් විශේෂයට අහිතකර ලෙස බලපෑ හැකිය. නිදන්ගත අවදානම් තක්සේරුවේදී, මරණ සඳහා NOEC 3 μg L−1 වූ අතර, ජලයේ ඇති සාන්ද්‍රණයන් විශේෂයට අවදානමක් ඇති කළ හැකි බව සනාථ කරයි55. එන්ඩොසල්ෆාන් සහ සයිපර්මෙත්‍රින් මිශ්‍රණයකට නිරාවරණය වූ R. arenarum කීටයන් සඳහා මාරාන්තික NOEC පැය 168 කට පසු 500 μg L−1 විය; මෙම අගය පැය 336 කට පසු 0.0005 μg L−1 දක්වා අඩු විය. කතුවරුන් පෙන්වා දෙන්නේ නිරාවරණය දිගු වන තරමට විශේෂයට හානිකර සාන්ද්‍රණයන් අඩු වන බවයි. එකම නිරාවරණ කාලය තුළ P. ග්‍රැසිලිස් අගයන්ට වඩා NOEC අගයන් වැඩි බව ඉස්මතු කිරීම ද වැදගත් වන අතර, සයිපර්මෙත්‍රින් සඳහා විශේෂ ප්‍රතිචාරය විශේෂ-විශේෂිත බව පෙන්නුම් කරයි. තවද, මරණ අනුපාතය අනුව, සයිපර්මෙත්‍රින් වලට නිරාවරණය වීමෙන් පසු P. ග්‍රැසිලිස් හි CHQ අගය 64.67 දක්වා ළඟා වූ අතර එය එක්සත් ජනපද පරිසර ආරක්ෂණ ඒජන්සිය විසින් නියම කරන ලද යොමු අගයට වඩා වැඩි වන අතර R. arenarum කීටයන්ගේ CHQ අගය ද මෙම අගයට වඩා වැඩි විය (CHQ > පැය 336 න් පසු 388.00), එයින් පෙන්නුම් කරන්නේ අධ්‍යයනය කරන ලද කෘමිනාශක උභයජීවී විශේෂ කිහිපයකට ඉහළ අවදානමක් ඇති කරන බවයි. P. ග්‍රැසිලිස් පරිවෘත්තීය සම්පූර්ණ කිරීමට ආසන්න වශයෙන් දින 30 ක් අවශ්‍ය බව සලකන විට, අධ්‍යයනය කරන ලද සයිපර්මෙත්‍රින් සාන්ද්‍රණය ආසාදිත පුද්ගලයින් කුඩා අවධියේදී වැඩිහිටි හෝ ප්‍රජනක අවධියට ඇතුළු වීම වැළැක්වීමෙන් ජනගහනයේ අඩුවීමට දායක විය හැකි බව නිගමනය කළ හැකිය.
ක්ෂුද්‍ර න්‍යෂ්ටීන් සහ අනෙකුත් එරිත්‍රෝසයිට් න්‍යෂ්ටික අසාමාන්‍යතා ගණනය කළ අවදානම් තක්සේරුවේදී, CHQ අගයන් 14.92 සිට 97.00 දක්වා පරාසයක පැවති අතර, එයින් පෙන්නුම් කළේ සයිපර්මෙත්‍රින් එහි ස්වාභාවික වාසස්ථානය තුළ පවා P. ග්‍රැසිලිස් වලට විභව ජෙනෝටොක්සික් අවදානමක් ඇති බවයි. මරණ අනුපාතය සැලකිල්ලට ගත් විට, P. ග්‍රැසිලිස් වලට දරාගත හැකි සෙනෝබයොටික් සංයෝගවල උපරිම සාන්ද්‍රණය 4.24 μg L−1 විය. කෙසේ වෙතත්, 1 μg/L තරම් අඩු සාන්ද්‍රණයන් ද ජෙනෝටොක්සික් බලපෑම් පෙන්නුම් කළේය. මෙම කරුණ අසාමාන්‍ය පුද්ගලයින් සංඛ්‍යාවේ වැඩිවීමට හේතු විය හැකි අතර ඔවුන්ගේ වාසස්ථානවල විශේෂවල වර්ධනයට හා ප්‍රජනනයට බලපාන අතර එමඟින් උභයජීවී ජනගහනයේ අඩුවීමක් ඇති විය හැකිය.
කෘමිනාශක සයිපර්මෙත්‍රින් හි වාණිජ සූත්‍රගත කිරීම් P. ග්‍රැසිලිස් සඳහා ඉහළ උග්‍ර සහ නිදන්ගත විෂ සහිත බවක් පෙන්නුම් කළේය. විෂ සහිත බලපෑම් හේතුවෙන් බොහෝ විට ඉහළ මරණ අනුපාත නිරීක්ෂණය කරන ලදී, ක්ෂුද්‍ර න්‍යෂ්ටීන් සහ එරිත්‍රෝසයිට් න්‍යෂ්ටික අසාමාන්‍යතා, විශේෂයෙන් දැති සහිත න්‍යෂ්ටීන්, ලොබ්ඩ් න්‍යෂ්ටීන් සහ වෙසිකියුලර් න්‍යෂ්ටීන් පැවතීම මගින් සාක්ෂි දරයි. ඊට අමතරව, අධ්‍යයනය කරන ලද විශේෂයන් උග්‍ර සහ නිදන්ගත යන දෙඅංශයෙන්ම වැඩි පාරිසරික අවදානම් පෙන්නුම් කළේය. අපගේ පර්යේෂණ කණ්ඩායම විසින් කරන ලද පෙර අධ්‍යයනයන් සමඟ ඒකාබද්ධව, සයිපර්මෙත්‍රින් හි විවිධ වාණිජ සූත්‍රගත කිරීම් පවා තවමත් ඇසිටිල්කොලිනෙස්ටරේස් (AChE) සහ බියුටිරයිල්කොලිනෙස්ටරේස් (BChE) ක්‍රියාකාරකම් අඩුවීමට සහ ඔක්සිකාරක ආතතියට හේතු වූ බව මෙම දත්ත පෙන්වා දුන් අතර, P. ග්‍රැසිලිස් හි පිහිනුම් ක්‍රියාකාරකම් සහ මුඛ විකෘතිතා59 හි වෙනස්කම් ඇති කළ අතර, සයිපර්මෙත්‍රින් හි වාණිජ සූත්‍රගත කිරීම් මෙම විශේෂයට ඉහළ මාරාන්තික සහ උපමාරක විෂ සහිත බවක් පෙන්නුම් කළේය. හාර්ට්මන් සහ වෙනත් අය. 60 හි සොයාගැනීම් වලට අනුව, අනෙකුත් පළිබෝධනාශක නවයක් සමඟ සසඳන විට, වාණිජමය සයිපර්මෙත්‍රින් සංයෝග P. ග්‍රැසිලිස් සහ එම ගණයේ තවත් විශේෂයක් (P. cuvieri) සඳහා වඩාත්ම විෂ සහිත බව සොයා ගන්නා ලදී. මෙයින් ඇඟවෙන්නේ පාරිසරික ආරක්ෂාව සඳහා නීත්‍යානුකූලව අනුමත කරන ලද සයිපර්මෙත්‍රින් සාන්ද්‍රණය ඉහළ මරණ අනුපාතයක් සහ දිගුකාලීන ජනගහන අඩුවීමක් ඇති කළ හැකි බවයි.
පරිසරයේ දක්නට ලැබෙන සාන්ද්‍රණයන් ඉහළ මරණ සංඛ්‍යාවක් ඇති කළ හැකි අතර P. gracilis සඳහා විභව අවදානමක් ඇති කළ හැකි බැවින්, උභයජීවීන්ට පළිබෝධනාශකයේ විෂ සහිත බව තක්සේරු කිරීම සඳහා වැඩිදුර අධ්‍යයනයන් අවශ්‍ය වේ. උභයජීවී විශේෂ පිළිබඳ පර්යේෂණ දිරිමත් කළ යුතුය, මන්ද මෙම ජීවීන් පිළිබඳ දත්ත, විශේෂයෙන් බ්‍රසීලියානු විශේෂ පිළිබඳ දත්ත හිඟ බැවිනි.
නිදන්ගත විෂ සහිත පරීක්ෂණය ස්ථිතික තත්වයන් යටතේ පැය 168 ක් (දින 7) පැවති අතර උපමාරක සාන්ද්‍රණයන් වූයේ: 1, 3, 6 සහ 20 μg ai L−1. අත්හදා බැලීම් දෙකෙහිම, ප්‍රතිකාර කණ්ඩායමකට ටැඩ්පෝල් 10 ක් අනුරූ හයක් සමඟ ඇගයීමට ලක් කරන ලද අතර, සාන්ද්‍රණයකට ටැඩ්පෝල් 60 ක් මුළු තිබුණි. මේ අතර, ජලය පමණක් ප්‍රතිකාර කිරීම සෘණ පාලනයක් ලෙස ක්‍රියා කළේය. සෑම අත්හදා බැලීමේ සැකසුමක්ම මිලි ලීටර් 500 ක ධාරිතාවක් සහ ද්‍රාවණය මිලි ලීටර් 50 කට ටැඩ්පෝල් 1 ක ඝනත්වයක් සහිත වඳ වීදුරු බඳුනකින් සමන්විත විය. වාෂ්පීකරණය වැළැක්වීම සඳහා නළය පොලිඑතිලීන් පටලයකින් ආවරණය කර ඇති අතර අඛණ්ඩව වාතනය කරන ලදී.
පැය 0, 96 සහ 168 ක කාලවලදී පළිබෝධනාශක සාන්ද්‍රණය තීරණය කිරීම සඳහා ජලය රසායනිකව විශ්ලේෂණය කරන ලදී. සබින් සහ තවත් අය 68 සහ මාටින් සහ තවත් අය 69 ට අනුව, සැන්ටා මාරියා ෆෙඩරල් විශ්ව විද්‍යාලයේ පළිබෝධනාශක විශ්ලේෂණ රසායනාගාරයේ (LARP) ත්‍රිත්ව චතුර්ධ්‍රැව ස්කන්ධ වර්ණාවලීක්ෂයට සම්බන්ධ කරන ලද වායු වර්ණදේහ විද්‍යාව භාවිතා කරමින් විශ්ලේෂණයන් සිදු කරන ලදී (Varian ආකෘතිය 1200, Palo Alto, California, USA). ජලයේ පළිබෝධනාශකවල ප්‍රමාණාත්මක නිර්ණය අතිරේක ද්‍රව්‍යයක් ලෙස දක්වා ඇත (වගුව SM1).
ක්ෂුද්‍ර න්‍යෂ්ටික පරීක්ෂණය (MNT) සහ රතු සෛල න්‍යෂ්ටික අසාමාන්‍යතා පරීක්ෂණය (RNA) සඳහා, එක් එක් ප්‍රතිකාර කණ්ඩායමෙන් ඉස්‌ගෙඩියන් 15 ක් විශ්ලේෂණය කරන ලදී. ඉස්‌ගෙඩියන් 5% ලිඩොකේන් (50 mg g-170) සමඟ නිර්වින්දනය කරන ලද අතර ඉවත දැමිය හැකි හෙපරිනීකරණය කළ සිරින්ජ භාවිතයෙන් හෘද සිදුරු කිරීම මගින් රුධිර සාම්පල එකතු කරන ලදී. රුධිර ආෙල්පන විෂබීජහරණය කළ අන්වීක්ෂ ස්ලයිඩ මත සකස් කර, වාතයෙන් වියළා, මිනිත්තු 2 ක් 100% මෙතනෝල් (4 °C) සමඟ සවි කර, පසුව අඳුරේ විනාඩි 15 ක් 10% ජිම්සා ද්‍රාවණයෙන් පැල්ලම් කරන ලදී. ක්‍රියාවලිය අවසානයේ, අතිරික්ත පැල්ලම් ඉවත් කිරීම සඳහා ස්ලයිඩ ආසවනය කළ ජලයෙන් සෝදා කාමර උෂ්ණත්වයේ දී වියළන ලදී.
MN සහ ENA වල පැවැත්ම තීරණය කිරීම සඳහා 71 අරමුණක් සහිතව 100× අන්වීක්ෂයක් භාවිතයෙන් එක් එක් ටැඩ්පෝලයෙන් අවම වශයෙන් රතු රුධිර සෛල 1000 ක් විශ්ලේෂණය කරන ලදී. සයිපර්මෙත්‍රින් සාන්ද්‍රණයන් සහ පාලනයන් සැලකිල්ලට ගනිමින් ටැඩ්පෝල වලින් රතු රුධිර සෛල 75,796 ක් ඇගයීමට ලක් කරන ලදී. පහත දැක්වෙන න්‍යෂ්ටික තුවාල වල සංඛ්‍යාතය තීරණය කිරීමෙන් කැරස්කෝ සහ අනෙකුත් අයගේ සහ ෆෙනෙක් සහ අනෙකුත් අයගේ ක්‍රමයට අනුව ජෙනෝටොක්සිසිටි විශ්ලේෂණය කරන ලදී: (1) න්‍යෂ්ටික සෛල: න්‍යෂ්ටික නොමැති සෛල; (2) ඇපොප්ටෝටික් සෛල: න්‍යෂ්ටික ඛණ්ඩනය, වැඩසටහන්ගත සෛල මරණය; (3) ද්වි න්‍යෂ්ටික සෛල: න්‍යෂ්ටික දෙකක් සහිත සෛල; (4) න්‍යෂ්ටික අංකුර හෝ බ්ලෙබ් සෛල: න්‍යෂ්ටික පටලයේ කුඩා නෙරා ඇති න්‍යෂ්ටීන් සහිත සෛල, ක්ෂුද්‍ර න්‍යෂ්ටීන්ට සමාන ප්‍රමාණයේ බ්ලෙබ්; (5) කාරියොලයිස් කරන ලද සෛල: අභ්‍යන්තර ද්‍රව්‍ය නොමැතිව න්‍යෂ්ටියේ දළ සටහන පමණක් ඇති සෛල; (6) නොච් කරන ලද සෛල: ඒවායේ හැඩයේ පැහැදිලි ඉරිතැලීම් හෝ නෝට්ටු සහිත න්‍යෂ්ටීන් සහිත සෛල, වකුගඩු හැඩැති න්‍යෂ්ටීන් ලෙසද හැඳින්වේ; (7) ලොබියුලේටඩ් සෛල: ඉහත සඳහන් කළ වෙසිලි වලට වඩා විශාල න්‍යෂ්ටික නෙරා ඇති සෛල; සහ (8) ක්ෂුද්‍ර සෛල: ඝනීභවනය වූ න්‍යෂ්ටීන් සහ අඩු වූ සයිටොප්ලාස්මයක් සහිත සෛල. වෙනස්කම් සෘණ පාලන ප්‍රතිඵල සමඟ සංසන්දනය කරන ලදී.
උග්‍ර විෂ සහිත පරීක්ෂණ ප්‍රතිඵල (LC50) GBasic මෘදුකාංගය සහ TSK-Trimmed Spearman-Karber ක්‍රමය භාවිතයෙන් විශ්ලේෂණය කරන ලදී74. නිදන්ගත පරීක්ෂණ දත්ත දෝෂ සාමාන්‍යභාවය (Shapiro-Wilks) සහ විචලනයේ සමජාතීයතාවය (Bartlett) සඳහා පූර්ව පරීක්ෂාවට ලක් කරන ලදී. ප්‍රතිඵල විචලනයේ ඒකපාර්ශ්වික විශ්ලේෂණය (ANOVA) භාවිතයෙන් විශ්ලේෂණය කරන ලදී. ටුකීගේ පරීක්ෂණය ඔවුන් අතර දත්ත සංසන්දනය කිරීමට භාවිතා කරන ලද අතර, ප්‍රතිකාර කණ්ඩායම සහ සෘණ පාලන කණ්ඩායම අතර දත්ත සංසන්දනය කිරීමට ඩනට්ගේ පරීක්ෂණය භාවිතා කරන ලදී.
LOEC සහ NOEC දත්ත ඩනට්ගේ පරීක්ෂණය භාවිතයෙන් විශ්ලේෂණය කරන ලදී. 95% ක වැදගත්කමක් සහිත Statistica 8.0 මෘදුකාංගය (StatSoft) භාවිතයෙන් සංඛ්‍යාන පරීක්ෂණ සිදු කරන ලදී (p < 0.05).