කෘතිම පළිබෝධනාශක බහුලව භාවිතා කිරීම ප්රතිරෝධී ජීවීන් බිහිවීම, පාරිසරික හායනය සහ මිනිස් සෞඛ්‍යයට හානි කිරීම ඇතුළු බොහෝ ගැටලුවලට හේතු වී තිබේ.එබැවින්, නව ක්ෂුද්ර ජීවීපළිබෝධනාශකමිනිස් සෞඛ්‍යයට සහ පරිසරයට ඉතා ඉක්මනින් අවශ්‍ය වන ඒවාය.මෙම අධ්‍යයනයේ දී, Enterobacter cloacae SJ2 මගින් නිපදවන rhamnolipid biosurfactant මදුරුවන් (Culex quinquefasciatus) සහ ටර්මයිට් (Odontotermes obesus) කීටයන් සඳහා විෂ වීම තක්සේරු කිරීමට භාවිතා කරන ලදී.ප්රතිකාර අතර මාත්‍රාව මත යැපෙන මරණ අනුපාතිකයක් ඇති බව ප්‍රතිඵල පෙන්වා දුන්නේය.වේයන් සහ මදුරු කීට ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් සඳහා පැය 48 ක LC50 (50% මාරක සාන්ද්‍රණය) අගය නිර්ණය කරන ලද්දේ රේඛීය නොවන ප්‍රතිගාමී වක්‍ර සවි කිරීමේ ක්රමයක් භාවිතා කරමිනි.ප්‍රතිඵලවලින් පෙන්නුම් කළේ ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වල කීට නාශක සහ ටර්මයිට් ක්‍රියාකාරකම්වල පැය 48ක LC50 අගයන් (95% විශ්වාසනීය පරතරය) 26.49 mg/L (පරාසය 25.40 සිට 27.57 දක්වා) සහ 33.43 mg/L (පරාසය 31.68 සිට 35.68 දක්වා) බවයි.histopathological පරීක්ෂණයට අනුව, biosurfactants සමඟ ප්රතිකාර කිරීම කීටයන් සහ වේයන් වල අවයව පටක වලට දැඩි හානි සිදු විය.මෙම අධ්‍යයනයේ ප්‍රතිඵලවලින් පෙනී යන්නේ Enterobacter cloacae SJ2 මගින් නිපදවන ක්ෂුද්‍රජීවී ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් Cx පාලනය සඳහා විශිෂ්ට සහ විභව ඵලදායී මෙවලමක් බවයි.quinquefasciatus සහ O. obesus.
නිවර්තන කලාපීය රටවල් මදුරුවන්ගෙන් බෝවන රෝග විශාල සංඛ්‍යාවක් අත්විඳිති1.මදුරුවන්ගෙන් බෝවන රෝගවල අදාළත්වය පුලුල්ව පැතිර ඇත.සෑම වසරකම මැලේරියාවෙන් පුද්ගලයන් 400,000 කට වඩා මිය යන අතර සමහර ප්රධාන නගර ඩෙංගු, කහ උණ, චිකුන්ගුන්‍යා සහ සිකා වැනි බරපතල රෝගවල වසංගතවලට මුහුණ දෙයි. 2 වාහක මගින් බෝවන රෝග ලොව පුරා ආසාදන හයෙන් එකකට සම්බන්ධ වන අතර මදුරුවන් වැඩිපුරම ඇති කරයි. සැලකිය යුතු අවස්ථා 3,4.Culex, Anopheles සහ Aedes යනු රෝග සම්ප්රේෂණය සමඟ බහුලව සම්බන්ධ වන මදුරු වර්ග තුනයි.Aedes aegypti මදුරුවා විසින් සම්ප්රේෂණය වන ආසාදනයක් වන ඩෙංගු උණ ව්‍යාප්තිය පසුගිය දශකය තුළ ඉහළ ගොස් ඇති අතර එය සැලකිය යුතු මහජන සෞඛ්‍ය තර්ජනයක් 4,7,8 මතු කරයි.ලෝක සෞඛ්‍ය සංවිධානයට (WHO) අනුව, ලෝක ජනගහනයෙන් 40% කට වඩා වැඩි පිරිසක් ඩෙංගු උණ අවදානමට ලක්ව ඇති අතර, රටවල් 100 කට වැඩි ගණනක වාර්ෂිකව මිලියන 50-100 නව රෝගීන් වාර්තා වේ9,10,11.ඩෙංගු රෝගය ලොව පුරා 12,13,14 ඉහළ ගොස් ඇති බැවින් එය ප්රධාන මහජන සෞඛ්‍ය ගැටලුවක් බවට පත්ව ඇත.සාමාන්‍යයෙන් අප්‍රිකානු ඇනෝෆිලිස් මදුරුවා ලෙස හඳුන්වන ඇනෝෆිලිස් ගැම්බියා, නිවර්තන සහ උපනිවර්තන කලාපවල මිනිස් මැලේරියාවේ වැදගත්ම වාහකයා වේ.බටහිර නයිල් වෛරසය, ශාන්ත ලුවී එන්සෙෆලයිටිස්, ජපන් එන්සෙෆලයිටිස් සහ අශ්වයන් සහ කුරුල්ලන්ගේ වෛරස් ආසාදන Culex මදුරුවන් විසින් සම්ප්රේෂණය කරනු ලබන අතර, බොහෝ විට පොදු ගෘහ මදුරුවන් ලෙස හැඳින්වේ.මීට අමතරව, ඔවුන් බැක්ටීරියා සහ පරපෝෂිත රෝග වල වාහකයන් වේ16.ලෝකයේ වේයන් විශේෂ 3,000 කට වඩා ඇති අතර ඒවා වසර මිලියන 150 කට වැඩි කාලයක් පුරා පැවතුනි.බොහෝ පළිබෝධකයන් පසෙහි ජීවත් වන අතර සෙලියුලෝස් අඩංගු ලී සහ දැව නිෂ්පාදන මත පෝෂණය වේ.ඉන්දියානු වේයන් Odontotermes obesus යනු වැදගත් භෝග සහ වැවිලි ගස් වලට දැඩි හානි සිදු කරන වැදගත් පලිබෝධයකි18.කෘෂිකාර්මික ප්‍රදේශවල, විවිධ අවස්ථා වලදී වේයන් ආක්‍රමණය විවිධ භෝග, ගස් විශේෂ සහ ගොඩනැගිලි ද්‍රව්‍යවලට දැවැන්ත ආර්ථික හානියක් සිදු කළ හැකිය.වේයන් මිනිසුන්ගේ සෞඛ්‍ය ගැටලු ද ඇති කළ හැකිය19.
වර්තමානයේ ඖෂධ සහ කෘෂිකාර්මික ක්ෂේත්‍රවල ක්ෂුද්ර ජීවීන් හා පළිබෝධකයන්ගෙන් ඇති වන ප්‍රතිරෝධය පිළිබඳ ගැටළුව සංකීර්ණයි20,21.එබැවින්, සමාගම් දෙකම නව ලාභදායී ප්‍රති-ක්ෂුද්ර ජීවී නාශක සහ ආරක්ෂිත ජෛව පළිබෝධනාශක සොයා බැලිය යුතුය.කෘත්‍රිම පළිබෝධනාශක දැන් පවතින අතර ඒවා බෝවන බවත් ඉලක්ක නොවන හිතකර කෘමීන් පලවා හරින බවත් පෙන්වා දී ඇත.මෑත වසරවලදී, විවිධ කර්මාන්තවල යෙදීම හේතුවෙන් ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් පිළිබඳ පර්යේෂණ පුළුල් වී ඇත.කෘෂිකාර්මික, පාංශු ප්‍රතිකර්ම, පෙට්‍රෝලියම් නිස්සාරණය, බැක්ටීරියා සහ කෘමීන් ඉවත් කිරීම සහ ආහාර සැකසීමේදී ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් ඉතා ප්‍රයෝජනවත් සහ අත්‍යවශ්‍ය වේ23,24.Biosurfactants හෝ microbial surfactants යනු වෙරළබඩ වාසස්ථානවල සහ තෙල්-දූෂිත ප්‍රදේශවල බැක්ටීරියා, යීස්ට් සහ දිලීර වැනි ක්ෂුද්ර ජීවීන් විසින් නිපදවන ජෛව මතුපිට රසායනික ද්‍රව්‍ය වේ25,26.රසායනිකව ව්‍යුත්පන්න වූ surfactants සහ biosurfactants ස්වභාවික පරිසරයෙන් සෘජුවම ලබා ගන්නා වර්ග දෙකකි27.විවිධ ජෛව මතුපිට ද්‍රව්‍ය සාගර වාසස්ථාන වලින් ලබා ගනී28,29.එබැවින් විද්යාඥයින් ස්වභාවික බැක්ටීරියා30,31 මත පදනම් වූ ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් නිෂ්පාදනය සඳහා නව තාක්ෂණයන් සොයමින් සිටිති.එවැනි පර්යේෂණවල දියුණුව පාරිසරික ආරක්ෂාව සඳහා මෙම ජීව විද්යාත්මක සංයෝගවල වැදගත්කම පෙන්නුම් කරයි32.Bacillus, Pseudomonas, Rhodococcus, Alcaligenes, Corynebacterium සහ මෙම බැක්ටීරියා වර්ග හොඳින් අධ්යයනය කරන ලද නියෝජිතයන්23,33.
පුළුල් පරාසයක යෙදීම් සහිත ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වර්ග බොහොමයක් තිබේ34.මෙම සංයෝගවල සැලකිය යුතු වාසියක් වන්නේ ඒවායින් සමහරක් ප්‍රතිබැක්ටීරීය, කීට නාශක සහ කෘමිනාශක ක්‍රියාකාරකම් තිබීමයි.මෙයින් අදහස් කරන්නේ ඒවා කෘෂිකාර්මික, රසායනික, ඖෂධ සහ රූපලාවන්ය කර්මාන්තවල භාවිතා කළ හැකි බවයි35,36,37,38.ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් සාමාන්‍යයෙන් දිරාපත් විය හැකි සහ පරිසර හිතකාමී බැවින්, ඒවා භෝග ආරක්ෂා කිරීම සඳහා ඒකාබද්ධ පළිබෝධ කළමනාකරණ වැඩසටහන් වල භාවිතා වේ39.මේ අනුව, Enterobacter cloacae SJ2 මගින් නිපදවන ක්ෂුද්ර ජීවී ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වල කීට නාශක සහ ටර්මයිට් ක්රියාකාරිත්වය පිළිබඳ මූලික දැනුම ලබාගෙන ඇත.අපි rhamnolipid ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වල විවිධ සාන්ද්‍රණයන්ට නිරාවරණය වන විට මරණ අනුපාතය සහ හිස්ටෝල් වෙනස්වීම් පරීක්ෂා කළෙමු.මීට අමතරව, ක්ෂුද්ර ඇල්ගී, ඩැෆ්නියා සහ මාළු සඳහා උග්ර විෂ වීම තීරණය කිරීම සඳහා අපි බහුලව භාවිතා වන ප්‍රමාණාත්මක ව්‍යුහ-ක්‍රියාකාරකම් (QSAR) පරිගණක වැඩසටහන පාරිසරික ව්‍යුහය-ක්‍රියාකාරීත්වය (ECOSAR) ඇගයීමට ලක් කළෙමු.
මෙම අධ්‍යයනයේ දී, විවිධ සාන්ද්‍රණයන්හි 30 සිට 50 mg/m (5 mg/ml පරතරයකින්) විවිධ සාන්ද්‍රණයන්හි පවිත්‍ර කරන ලද ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වල ප්‍රතිදේහජනක ක්‍රියාකාරකම් (විෂ සහිත බව) ඉන්දියානු වේයන්, O. තරබාරුකම සහ සිව්වන විශේෂයට එරෙහිව පරීක්ෂා කරන ලදී.instar Cx හි කීටයන්.quinquefasciatus මදුරුවන්ගේ කීටයන්.O. obesus සහ Cx වලට එරෙහිව පැය 48ක් පුරා Biosurfactant LC50 සාන්ද්‍රණය.C. solanacearum.රේඛීය නොවන ප්‍රතිගාමී වක්‍ර සවි කිරීමේ ක්රමයක් භාවිතයෙන් මදුරු කීටයන් හඳුනා ගන්නා ලදී.ප්‍රතිඵලවලින් පෙනී ගියේ ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් සාන්ද්‍රණය වැඩි වීමත් සමඟ වේයන් මරණ සංඛ්‍යාව වැඩි වූ බවයි.ප්‍රතිඵලවලින් පෙන්නුම් කළේ ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වල කීට ක්‍රියාකාරකම් (රූපය 1) සහ වේයන් නාශක ක්‍රියාකාරකම් (රූපය 2), පැය 48 LC50 අගයන් (95% CI) 26.49 mg/L (25.40 සිට 27.57 දක්වා) සහ 33.43 mg/ l (රූපය 31.09 සිට 35.68 දක්වා), පිළිවෙලින් (වගුව 1).උග්ර විෂ වීම (පැය 48) අනුව, ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් පරීක්ෂණයට ලක් වූ ජීවීන්ට "හානිකර" ලෙස වර්ගීකරණය කර ඇත.මෙම අධ්‍යයනයේ දී නිපදවන ලද ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් නිරාවරණයෙන් පැය 24-48 තුළ 100% මරණ අනුපාතයක් සහිත විශිෂ්ට කීට ක්‍රියාකාරකම් පෙන්නුම් කළේය.
larvicidal ක්‍රියාකාරකම් සඳහා LC50 අගය ගණනය කරන්න.සාපේක්ෂ මරණ අනුපාතය (%) සඳහා රේඛීය නොවන ප්‍රතිගාමී වක්‍ර සවි කිරීම (ඝන රේඛාව) සහ 95% විශ්වාස අන්තරාලය (සෙවන ලද ප්‍රදේශය).
වේයන් විරෝධී ක්‍රියාකාරකම් සඳහා LC50 අගය ගණනය කරන්න.සාපේක්ෂ මරණ අනුපාතය (%) සඳහා රේඛීය නොවන ප්‍රතිගාමී වක්‍ර සවි කිරීම (ඝන රේඛාව) සහ 95% විශ්වාස අන්තරාලය (සෙවන ලද ප්‍රදේශය).
අත්හදා බැලීම අවසානයේ දී, අන්වීක්ෂය යටතේ රූප විද්යාත්මක වෙනස්කම් සහ විෂමතා නිරීක්ෂණය කරන ලදී.40x විශාලනයකදී පාලන සහ ප්රතිකාර කරන ලද කණ්ඩායම්වල රූප විද්යාත්මක වෙනස්කම් නිරීක්ෂණය කරන ලදී.රූප සටහන 3 හි පෙන්වා ඇති පරිදි, ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් සමඟ ප්රතිකාර කරන ලද කීටයන්ගෙන් බහුතරයක වර්ධන දුර්වලතා ඇති විය.රූප සටහන 3a සාමාන්‍ය Cx පෙන්වයි.quinquefasciatus, Figure 3b හි විෂම Cx පෙන්නුම් කරයි.නෙමටෝඩා කීටයන් පහක් ඇති කරයි.
Culex quinquefasciatus කීටයන් වර්ධනය කිරීම සඳහා sublethal (LC50) ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වල බලපෑම.40× විශාලනයකදී සාමාන්‍ය Cx එකක සැහැල්ලු අන්වීක්ෂ රූපය (a).quinquefasciatus (b) අසාමාන්ය Cx.නෙමටෝඩා කීටයන් පහක් ඇති කරයි.
වර්තමාන අධ්‍යයනයේ දී, ප්රතිකාර කරන ලද කීටයන් (පය. 4) සහ වේයන් (රූපය 5) පිළිබඳ හිස්ටොලොජිකල් පරීක්ෂණයෙන් උදර ප්‍රදේශය අඩු කිරීම සහ මාංශ පේශි, එපිටිලියල් ස්ථර සහ සමට හානි ඇතුළු අසාමාන්‍යතා කිහිපයක් අනාවරණය විය.මැද බඩවැල.මෙම අධ්‍යයනයේ දී භාවිතා කරන ලද ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වල නිෂේධනීය ක්‍රියාකාරිත්වයේ යාන්ත්‍රණය හිස්ටොලොජි මගින් අනාවරණය විය.
සාමාන්‍ය ප්රතිකාර නොකළ 4 වැනි අදියරේ Cx කීටයන්ගේ හිස්ටෝපාතිවේදය.quinquefasciatus කීටයන් (පාලනය: (a,b)) සහ biosurfactant සමඟ ප්රතිකාර (ප්රතිකාර: (c,d)).ඊතල මගින් ප්රතිකාර කරන ලද බඩවැල් එපිටිලියම් (එපී), න්‍යෂ්ටි (n) සහ මාංශ පේශි (මු) දක්වයි.තීරුව = 50 µm.
සාමාන්‍ය ප්රතිකාර නොකළ O. තරබාරුකමේ histopathology (පාලනය: (a,b)) සහ biosurfactant ප්රතිකාර (ප්රතිකාර: (c,d)).ඊතල මගින් බඩවැල් එපිටිලියම් (එපි) සහ මාංශ පේශි (මු) පෙන්නුම් කරයි.තීරුව = 50 µm.
මෙම අධ්‍යයනයේ දී, ප්‍රාථමික නිෂ්පාදකයින්ට (හරිත ඇල්ගී), ප්‍රාථමික පාරිභෝගිකයින්ට (ජල මැක්කන්) සහ ද්විතියික පාරිභෝගිකයින්ට (මාළු) රම්නොලිපිඩ් ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් නිෂ්පාදනවල උග්ර විෂ සහිත බව පුරෝකථනය කිරීමට ECOSAR භාවිතා කරන ලදී.මෙම වැඩසටහන අණුක ව්‍යුහය මත පදනම්ව විෂ බව තක්සේරු කිරීම සඳහා සංකීර්ණ ප්‍රමාණාත්මක ව්‍යුහ-ක්‍රියාකාරී සංයෝග ආකෘති භාවිතා කරයි.මෙම ආකෘතිය ජලජ විශේෂ සඳහා ද්‍රව්‍යවල උග්ර හා දිගු කාලීන විෂ බව ගණනය කිරීමට ව්‍යුහ-ක්‍රියාකාරී (SAR) මෘදුකාංගය භාවිතා කරයි.විශේෂයෙන්, වගුව 2 මගින් විශේෂ කිහිපයක් සඳහා ඇස්තමේන්තුගත මධ්‍යන්‍ය මාරාන්තික සාන්ද්‍රණය (LC50) සහ මධ්‍යන්‍ය ඵලදායී සාන්ද්‍රණය (EC50) සාරාංශ කරයි.රසායනික ද්‍රව්‍ය වර්ගීකරණය සහ ලේබල් කිරීම පිළිබඳ ගෝලීය එකඟතාවයකින් යුත් පද්ධතිය භාවිතයෙන් සැක සහිත විෂ බව මට්ටම් හතරකට වර්ග කර ඇත (වගුව 3).
වාහකයන් මගින් බෝවන රෝග, විශේෂයෙන්ම මදුරුවන් සහ ඊඩිස් මදුරුවන් ප්‍රභේද පාලනය කිරීම.ඊජිප්තුවරුන්, දැන් දුෂ්කර වැඩ 40,41,42,43,44,45,46.pyrethroids සහ organophosphates වැනි රසායනිකව ලබා ගත හැකි සමහර පළිබෝධනාශක තරමක් ප්‍රයෝජනවත් වුවද, ඒවා දියවැඩියාව, ප්‍රජනක ආබාධ, ස්නායු ආබාධ, පිළිකා සහ ශ්වසන රෝග ඇතුළු මිනිස් සෞඛ්‍යයට සැලකිය යුතු අවදානම් ඇති කරයි.එපමණක් නොව, කාලයත් සමඟ මෙම කෘමීන් ඒවාට ප්රතිරෝධී විය හැක13,43,48.මේ අනුව, ඵලදායී හා පරිසර හිතකාමී ජෛව පාලන පියවරයන් මදුරු මර්දන සඳහා වඩාත් ජනප්රිය ක්රමයක් බවට පත්වනු ඇත49,50.Benelli51 යෝජනා කළේ මදුරු වාහකයන් කල් ඇතිව පාලනය කිරීම නාගරික ප්‍රදේශවල වඩාත් ඵලදායී වනු ඇති නමුත් ග්‍රාමීය ප්‍රදේශවල කීට නාශක භාවිතය නිර්දේශ නොකළ බවයි.Tom et al 53 ද යෝජනා කළේ මදුරුවන් ඔවුන්ගේ නොමේරූ අවධියේදී පාලනය කිරීම ආරක්ෂිත සහ සරල උපාය මාර්ගයක් වනු ඇති බැවින් ඔවුන් පාලන නියෝජිතයින්ට වඩා සංවේදී වන බැවිනි.
ප්‍රබල වික්‍රියාවක් (Enterobacter cloacae SJ2) මගින් ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් නිෂ්පාදනය ස්ථාවර සහ හොඳ කාර්යක්ෂමතාවයක් පෙන්නුම් කළේය.අපගේ පෙර අධ්යයනය වාර්තා කළේ Enterobacter cloacae SJ2 භෞතික රසායනික පරාමිතීන් භාවිතා කරමින් ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් නිෂ්පාදනය ප්‍රශස්ත කරන බවයි.ඔවුන්ගේ අධ්‍යයනයට අනුව, විභව E. cloacae හුදකලාවක් මගින් biosurfactant නිෂ්පාදනය සඳහා ප්‍රශස්ත තත්ත්‍වයන් වූයේ පැය 36ක් ඉන්කියුබේෂන්, 150 rpm, pH 7.5, 37 °C, ලවණතාව 1 ppt, කාබන් ප්‍රභවය ලෙස 2% ග්ලූකෝස්, 1% යීස්ට්. .2.61 g/L biosurfactant ලබා ගැනීම සඳහා සාරය නයිට්‍රජන් ප්‍රභවයක් ලෙස භාවිතා කරන ලදී.මීට අමතරව, ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් TLC, FTIR සහ MALDI-TOF-MS භාවිතයෙන් සංලක්ෂිත විය.රම්නොලිපිඩ් යනු ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් එකක් බව මෙයින් තහවුරු විය.Glycolipid biosurfactants යනු අනෙකුත් ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වර්ගවල වඩාත් තීව්‍ර ලෙස අධ්යයනය කරන ලද පන්තියකි.ඒවා කාබෝහයිඩ්රේට් සහ ලිපිඩ කොටස්, ප්රධාන වශයෙන් මේද අම්ල දාම වලින් සමන්විත වේ.ග්ලයිකොලිපිඩ් අතර, ප්රධාන නියෝජිතයන් වන්නේ rhamnolipid සහ sophorolipid56 ය.රම්නොලිපිඩ් වල මොනෝ-හෝ ඩයි-අයි-හයිඩ්‍රොක්සයිඩකැනොයික් අම්ලය 57 හා සම්බන්ධ රම්නෝස් කොටස් දෙකක් අඩංගු වේ.වෛද්‍ය සහ ඖෂධ කර්මාන්තවල රම්නොලිපිඩ් භාවිතය හොඳින් තහවුරු වී ඇත.
ශ්වසන සිෆෝන්හි ජලභීතික කලාපය සමඟ ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් අන්තර්ක්‍රියා කිරීම මගින් ජලය එහි ස්ටෝමැටල් කුහරය හරහා ගමන් කිරීමට ඉඩ සලසයි, එමඟින් කීටයන් ජලජ පරිසරය සමඟ සම්බන්ධතා වැඩි කරයි.ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් පැවතීම ස්වසනාලයට ද බලපාන අතර එහි දිග මතුපිටට සමීප වන අතර එමඟින් කීටයන් මතුපිටට බඩගාගෙන හුස්ම ගැනීම පහසු කරයි.එහි ප්රතිඵලයක් ලෙස ජලය මතුපිට ආතතිය අඩු වේ.කීටයන්ට ජල මතුපිටට සම්බන්ධ විය නොහැකි බැවින්, ඔවුන් ටැංකියේ පතුලට වැටී, ජල ස්ථිතික පීඩනය කඩාකප්පල් කරන අතර, අධික බලශක්ති වියදමක් සහ දියේ ගිලීමෙන් මරණයට පත් වේ.සමාන ප්‍රතිඵල Ghribi61 විසින් ලබා ගන්නා ලදී, එහිදී Bacillus subtilis විසින් නිෂ්පාදනය කරන ලද ජෛව මතුපිටකයක් Ephestia kuehniella ට එරෙහිව larvicidal ක්‍රියාකාරකම් ප්‍රදර්ශනය කරන ලදී.ඒ හා සමානව, Cx හි larvicidal ක්රියාකාරිත්වය.Das සහ Mukherjee23 ද quinquefasciatus කීටයන් මත චක්‍රීය lipopeptides වල බලපෑම තක්සේරු කරන ලදී.
මෙම අධ්‍යයනයේ ප්‍රතිඵල Cx ට එරෙහිව rhamnolipid biosurfactants වල larvicidal ක්‍රියාකාරකම් ගැන සැලකිලිමත් වේ.quinquefasciatus මදුරුවන් මරා දැමීම කලින් ප්‍රකාශයට පත් කළ ප්‍රතිඵලවලට අනුකූල වේ.උදාහරණයක් ලෙස, Bacillus ගණයේ විවිධ බැක්ටීරියා මගින් නිපදවන surfactin මත පදනම් වූ biosurfactants භාවිතා වේ.සහ Pseudomonas spp.සමහර මුල් වාර්තා 64,65,66 Bacillus subtilis23 වෙතින් lipopeptide biosurfactants වල කීටයන් මරා දැමීමේ ක්‍රියාකාරකම් වාර්තා කර ඇත.දීපාලි සහ අල්.63 Stenotropomonas maltophilia වලින් හුදකලා වූ rhamnolipid biosurfactant 10 mg/L සාන්ද්‍රණයකදී ප්‍රබල larvicidal ක්‍රියාකාරකම් ඇති බව සොයා ගන්නා ලදී.සිල්වා සහ අල්.67 1 g/L සාන්ද්‍රණයකදී Ae වලට එරෙහිව rhamnolipid biosurfactant වල larvicidal ක්‍රියාකාරකම් වාර්තා කරන ලදී.ඊඩිස් ඊජිප්ටි.Kanakdande et al.68 වාර්තා කළේ Bacillus subtilis මගින් නිපදවන lipopeptide biosurfactants යුකැලිප්ටස් හි lipophilic භාගය සමඟ Culex කීටයන් සහ වේයන් තුළ සමස්ත මරණවලට හේතු වූ බවයි.ඒ හා සමානව, Masendra et al.69 වාර්තා කරන ලද සේවක කුහුඹුවන් (Cryptotermes cynocephalus Light.) E. බොරතෙල් නිස්සාරණයේ lipophilic n -hexane සහ EtOAc භාගවල මරණ අනුපාතය 61.7% කි.
Parthipan et al 70 විසින් මැලේරියා පරපෝෂිත ප්ලාස්මෝඩියම් වාහකයෙකු වන Anopheles Stephensi ට එරෙහිව Bacillus subtilis A1 සහ Pseudomonas stutzeri NA3 විසින් නිෂ්පාදනය කරන ලද lipopeptide ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් කෘමිනාශක භාවිතය වාර්තා කරන ලදී.කීටයන් සහ pupae වැඩි කාලයක් ජීවත් වන බවත්, කෙටි ඩිම්බ මෝචන කාල සීමාවන් ඇති බවත්, වඳ බවත්, විවිධ සාන්ද්‍රණ ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් සමඟ ප්රතිකාර කළ විට කෙටි ආයු කාලයක් ඇති බවත් ඔවුන් නිරීක්ෂණය කළහ.B. subtilis biosurfactant A1 හි නිරීක්ෂණය කරන ලද LC50 අගයන් විවිධ කීට තත්වයන් සඳහා (එනම් කීටයන් I, II, III, IV සහ අදියර pupae) පිළිවෙලින් 3.58, 4.92, 5.37, 7.10 සහ 7.99 mg/L විය.සංසන්දනාත්මකව, Pseudomonas stutzeri NA3 හි කීට අවධීන් I-IV සහ pupal අදියර සඳහා ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් පිළිවෙලින් 2.61, 3.68, 4.48, 5.55 සහ 6.99 mg/L විය.දිවි ගලවා ගත් කීටයන් සහ pupae වල ප්‍රමාද වූ සංසිද්ධිය කෘමිනාශක ප්රතිකාර මගින් ඇති වූ සැලකිය යුතු කායික හා පරිවෘත්තීය බාධාවන්ගේ ප්රතිඵලයක් ලෙස සැලකේ.
Wickerhamomyces anomalus strain CCMA 0358 Aedes මදුරුවන්ට එරෙහිව 100% larvicidal ක්‍රියාකාරකම් සහිත ජෛව මතුපිටක් නිපදවයි.aegypti 24-පැය පරතරය 38 සිල්වා සහ වෙනත් අය විසින් වාර්තා කරන ලද ප්‍රමාණයට වඩා වැඩි විය.සූරියකාන්ත තෙල් කාබන් ප්‍රභවයක් ලෙස යොදා ගනිමින් Pseudomonas aeruginosa වලින් නිපදවන ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් එකක් පැය 48ක් ඇතුළත කීටයන්ගෙන් 100%ක් මරා දමන බව පෙන්වා දී ඇත.Abinaya et al.72 සහ Pradhan et al.73 ද Bacillus ගණයේ හුදකලා කිහිපයක් විසින් නිපදවන මතුපිටකවල කීට නාශක හෝ කෘමිනාශක බලපෑම් පෙන්නුම් කරන ලදී.සෙන්තිල්-නාදන් සහ වෙනත් අය විසින් කලින් ප්‍රකාශයට පත් කරන ලද අධ්‍යයනයක්.ශාක කලපු වලට නිරාවරණය වන මදුරු කීටයන්ගෙන් 100% ක් මිය යාමට ඉඩ ඇති බව සොයා ගන්නා ලදී.74.
කෘමි නාශක මගින් කෘමි ජීව විද්‍යාව කෙරෙහි ඇති වන මාරාන්තික බලපෑම් තක්සේරු කිරීම ඒකාබද්ධ පළිබෝධ කළමනාකරණ වැඩසටහන් සඳහා ඉතා වැදගත් වේ, මන්ද යත් උපමරණ මාත්‍රා / සාන්ද්‍රණයන් කෘමීන් විනාශ නොකරන නමුත් ජීව විද්යාත්මක ලක්ෂණ කඩාකප්පල් කිරීමෙන් අනාගත පරම්පරාවේ කෘමි ගහනය අඩු කළ හැකි බැවිනි.Siqueira et al 75 විසින් 50 සිට 300 mg/m දක්වා විවිධ සාන්ද්රණයකින් පරීක්ෂා කළ විට rhamnolipid biosurfactant (300 mg/ml) සම්පූර්ණ larvicidal ක්‍රියාකාරකම් (100% මරණ) නිරීක්ෂණය කරන ලදී.Aedes aegypti වික්‍රියා වල කීට අවධිය.ඔවුන් කීටයන්ගේ පැවැත්මට සහ පිහිනුම් ක්‍රියාකාරකම්වලට මරණයට කාලය සහ උපහාර සාන්ද්‍රණයේ බලපෑම් විශ්ලේෂණය කළහ.මීට අමතරව, ඔවුන් ජීව සර්ෆැක්ටන්ට් (උදා, 50 mg/mL සහ 100 mg/mL) sublethal සාන්ද්‍රණයට නිරාවරණය වීමෙන් පැය 24-48 කට පසුව පිහිනුම් වේගය අඩුවීමක් නිරීක්ෂණය කරන ලදී.නිරාවරණ පළිබෝධකයන්ට බහුවිධ හානි සිදුකිරීමේදී වඩාත් ඵලදායී ලෙස ප්‍රබල උපක්‍රමශීලී භූමිකාවන් ඇති විෂ වර්ග සැලකේ.
අපගේ ප්‍රතිඵලවල histological නිරීක්ෂණවලින් පෙනී යන්නේ Enterobacter cloacae SJ2 මගින් නිපදවන ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් මදුරු (Cx. quinquefasciatus) සහ ටර්මයිට් (O. obesus) කීටයන්ගේ පටක සැලකිය යුතු ලෙස වෙනස් කරන බවයි.ඇන් හි බැසිල් තෙල් සකස් කිරීම නිසා සමාන විෂමතා ඇති විය.gambiaes.s සහ An.arabica Ochola77 විසින් විස්තර කරන ලදී.Kamaraj et al.78 ද An හි එම රූප විද්යාත්මක අසාමාන්‍යතා විස්තර කළේය.ස්ටෙෆනිගේ කීටයන් රන් නැනෝ අංශුවලට නිරාවරණය විය.වසන්ත-ශ්‍රීනිවාසන් et al.79 ද වාර්තා කළේ එඬේරාගේ මුදල් පසුම්බිය සගන්ධ තෙල් ඊඩිස් ඇල්බොපික්ටස් හි කුටීර සහ එපිටිලියල් ස්ථරවලට දැඩි ලෙස හානි කළ බවයි.ඊඩිස් ඊජිප්ටි.රාඝවේන්ද්‍රන් සහ වෙනත් අය වාර්තා කළේ දේශීය පෙනිසිලියම් දිලීරයක මයිසිලියල් සාරය 500 mg/ml මගින් මදුරු කීටයන්ට ප්රතිකාර කළ බවයි.Ae දරුණු histological හානි පෙන්නුම් කරයි.aegypti සහ Cx.මරණ අනුපාතය 80. මීට පෙර, Abinaya et al.An හි සිව්වන අදියර කීටයන් අධ්යයනය කරන ලදී.ස්ටීවන්සි සහ ඒ.aegypti විසින් Aedes aegypti හි B. licheniformis exopolysaccharides සමඟ ප්රතිකාර කරන ලද ආමාශයික cecum, මාංශ පේශි ක්ෂය වීම, ස්නායු ලණු ganglia වලට හානි වීම සහ අසංවිධානාත්මක වීම ඇතුළු බොහෝ histological වෙනස්කම් සොයා ගන්නා ලදී.Raghavendran et al.ට අනුව, P. daleae mycelial extract සමඟ ප්රතිකාර කිරීමෙන් පසු, පරීක්ෂා කරන ලද මදුරුවන්ගේ (4th instar කීටයන්) මැද බඩවැලේ සෛල, බඩවැල් ලුමෙන් ඉදිමීම, අන්තර් සෛලීය අන්තර්ගතයේ අඩුවීමක් සහ න්‍යෂ්ටික පරිහානිය 81 පෙන්නුම් කළේය.echinacea පත්‍ර සාරය සමඟ ප්රතිකාර කරන ලද මදුරු කීටයන් තුළ ද එම histological වෙනස්කම් නිරීක්ෂණය කරන ලද අතර, ප්රතිකාර කළ සංයෝගවල කෘමිනාශක විභවය පෙන්නුම් කරයි50.
ECOSAR මෘදුකාංග භාවිතයට ජාත්‍යන්තර පිළිගැනීමක් ලැබී ඇත82.ECOSAR ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වල ක්ෂුද්ර ඇල්ගී (C. vulgaris), මත්ස්‍ය සහ ජල මැක්කන් (D. Magna) වලට ඇති උග්ර විෂ බව එක්සත් ජාතීන්ගේ සංවිධානය විසින් නිර්වචනය කරන ලද "විෂ සහිත" කාණ්ඩයට අයත් වන බව වත්මන් පර්යේෂණ මගින් යෝජනා කරයි83.ද්‍රව්‍යවල උග්ර හා දිගු කාලීන විෂ බව පුරෝකථනය කිරීම සඳහා ECOSAR පරිසර විෂ සහිත ආකෘතිය SAR සහ QSAR භාවිතා කරන අතර කාබනික දූෂකවල විෂ බව පුරෝකථනය කිරීමට බොහෝ විට භාවිතා කරයි82,84.
Paraformaldehyde, sodium phosphate buffer (pH 7.4) සහ මෙම අධ්යයනය සඳහා භාවිතා කරන අනෙකුත් සියලුම රසායනික ද්‍රව්‍ය ඉන්දියාවේ HiMedia Laboratories වෙතින් මිලදී ගන්නා ලදී.
ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් නිෂ්පාදනය එකම කාබන් ප්‍රභවය ලෙස 1% බොරතෙල් සමඟ පරිපූරණය කරන ලද වඳ බුෂ්නෙල් හාස් මාධ්‍යයේ මිලි ලීටර් 200 ක් අඩංගු මිලිලීටර් 500 අර්ලන්මෙයර් ප්ලාස්ක් වල සිදු කරන ලදී.Enterobacter cloacae SJ2 (1.4 × 104 CFU/ml) හි පූර්ව සංස්කෘතියක් දින 7 ක් සඳහා 37 ° C, 200 rpm දී කක්ෂීය ෂේකර් මත එන්නත් කර වගා කරන ලදී.ඉන්කියුබේෂන් කාල සීමාවෙන් පසුව, 4 ° C දී විනාඩි 20 ක් සඳහා 3400×g හි සංස්කෘතික මාධ්‍යය කේන්ද්‍රාපසාරී කිරීමෙන් ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් නිස්සාරණය කරන ලද අතර එහි ප්රතිඵලයක් ලෙස ලැබෙන අධි ප්‍රවාහය පිරික්සීමේ අරමුණු සඳහා භාවිතා කරන ලදී.ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වල ප්‍රශස්තකරණ ක්‍රියා පටිපාටි සහ ගුනාංගීකරනය අපගේ පෙර අධ්‍යයනයෙන් අනුගමනය කරන ලදී26.
Culex quinquefasciatus කීටයන් තමිල්නාඩුවේ (ඉන්දියාව) පලන්චිපේටයි, සමුද්‍ර ජීව විද්‍යාව පිළිබඳ උසස් අධ්‍යයන මධ්‍යස්ථානයෙන් (CAS) ලබා ගන්නා ලදී.කීටයන් 27 ± 2 ° C සහ 12:12 (ආලෝකය: අඳුර) ඡායා කාල පරිච්ඡේදවල දී ඩයෝනීකරණය කළ ජලය පිරවූ ප්ලාස්ටික් බහාලුම්වල ඇති කරන ලදී.මදුරු කීටයන්ට 10% ග්ලූකෝස් ද්‍රාවණයක් ලබා දී ඇත.
විවෘත හා අනාරක්ෂිත සෙප්ටික් ටැංකි වල Culex quinquefasciatus කීටයන් සොයාගෙන ඇත.රසායනාගාරයේ කීටයන් හඳුනා ගැනීමට සහ වගා කිරීමට සම්මත වර්ගීකරණ මාර්ගෝපදේශ භාවිතා කරන්න85.ලෝක සෞඛ්‍ය සංවිධානයේ 86 හි නිර්දේශයන්ට අනුකූලව ලර්විසිකල් පරීක්ෂණ සිදු කරන ලදී.එස්.එච්.quinquefasciatus හි සිව්වන අදියර කීටයන් ඔවුන්ගේ ධාරිතාවයෙන් තුනෙන් දෙකක වායු පරතරයක් සහිත 25 ml සහ 50 ml කාණ්ඩවල සංවෘත නල වල එකතු කරන ලදී.Biosurfactant (0-50 mg/ml) එක් එක් නලයට තනි තනිව එකතු කර 25 ° C දී ගබඩා කර ඇත.පාලන නළය භාවිතා කළේ ආසවනය කළ ජලය (මිලි ලීටර් 50) පමණි.මියගිය කීටයන් පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කාලය (පැය 12-48) 87 තුළ පිහිනීමේ කිසිදු සලකුනක් නොපෙන්වන අය ලෙස සැලකේ.සමීකරණය භාවිතා කර කීට මරණ ප්‍රතිශතය ගණනය කරන්න.(1)88.
Odontotermitidae පවුලට ඉන්දියානු වේයන් Odontotermes obesus ඇතුළත් වේ, කෘෂිකර්ම මණ්ඩපයේ (අන්නමලෙයි විශ්ව විද්‍යාලය, ඉන්දියාව) දිරාපත් වන ලොග වල දක්නට ලැබේ.මෙම ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් (0-50 mg/ml) හානිකරද යන්න තීරණය කිරීම සඳහා සාමාන්‍ය ක්‍රියා පටිපාටි භාවිතා කරමින් පරීක්ෂා කරන්න.මිනිත්තු 30 ක් සඳහා ලැමිනර් වායු ප්රවාහයේ වියළීමකින් පසු, වොට්මන් කඩදාසි සෑම තීරුවක්ම 30, 40 හෝ 50 mg / ml සාන්ද්රණයකින් biosurfactant සමඟ ආලේප කර ඇත.පෙර-ආලේපිත සහ ආලේප නොකළ කඩදාසි තීරු පෙට්‍රි කෑමක් මධ්‍යයේ පරීක්ෂා කර සංසන්දනය කරන ලදී.සෑම පෙට්‍රි දීසියකම O. obesus ක්‍රියාකාරී වේයන් තිහක් පමණ අඩංගු වේ.පාලනය සහ පරීක්ෂණ වේයන් සඳහා ආහාර ප්‍රභවයක් ලෙස තෙත් කඩදාසි ලබා දෙන ලදී.සියලුම තහඩු පුර්ව ලියාපදිංචි තක්සේරු කාලය පුරාම කාමර උෂ්ණත්වයේ තබා ඇත.12, 24, 36 සහ 48 පැය 89,90 ට පසු වේයන් මිය ගියේය.විවිධ ජෛව මතුපිට සාන්ද්‍රණයන්හි වේයන් මරණ ප්‍රතිශතය තක්සේරු කිරීමට සමීකරණය 1 පසුව භාවිතා කරන ලදී.(2)
සාම්පල අයිස් මත තබා 0.1 M සෝඩියම් පොස්පේට් බෆරය (pH 7.4) මිලි ලීටර් 100 ක් අඩංගු ක්ෂුද්ර ටියුබ් වල අසුරා රජීව් ගාන්ධි ජලජීවී වගා මධ්‍යස්ථානයේ (RGCA) මධ්‍යම ජලජීවී වගා ව්‍යාධි විද්‍යාගාරයට (CAPL) යවන ලදී.හිස්ටොලොජි රසායනාගාරය, සර්කාලි, මයිලඩුතුරෙයි.වැඩිදුර විශ්ලේෂණය සඳහා දිස්ත්‍රික්කය, තමිල්නාඩු, ඉන්දියාව.සාම්පල වහාම පැය 48 ක් සඳහා 37 ° C දී 4% paraformaldehyde හි සවි කර ඇත.
සවි කිරීමේ අදියරෙන් පසුව, ද්රව්යය 0.1 M සෝඩියම් පොස්පේට් බෆරයකින් (pH 7.4) තුන් වරක් සෝදා, එතනෝල් හි පියවරෙන් පියවර විජලනය කර දින 7 ක් LEICA ෙරසින් පොඟවා ඇත.එවිට ද්රව්යය දුම්මල සහ පොලිමරයිසර් වලින් පුරවා ඇති ප්ලාස්ටික් අච්චුවක තබා ඇති අතර, ද්රව්යය අඩංගු බ්ලොක් සම්පූර්ණයෙන්ම බහුඅවයවීකරණය වන තෙක් 37 ° C දක්වා රත් කළ උඳුනක තබා ඇත.
බහුඅවයවීකරණයෙන් පසුව, බ්ලොක් LEICA RM2235 මයික්‍රොටෝමයක් (Rankin Biomedical Corporation 10,399 Enterprise Dr. Davisburg, MI 48,350, USA) භාවිතා කරමින් 3 mm ඝණකම දක්වා කපා ඇත.කොටස් ස්ලයිඩ මත කාණ්ඩගත කර ඇති අතර, එක් ස්ලයිඩයකට කොටස් හයක් ඇත.ස්ලයිඩ කාමර උෂ්ණත්වයේ දී වියළන ලද අතර, පසුව විනාඩි 7 ක් සඳහා hematoxylin සමග පැල්ලම් කර විනාඩි 4 ක් ගලා යන ජලය සමග සෝදා ඇත.මීට අමතරව, විනාඩි 5 ක් සඳහා eosin විසඳුම සමට යොදන අතර විනාඩි 5 ක් ගලා යන ජලය සමග මෙයට පිළියමක්.
විවිධ නිවර්තන මට්ටම් වල ජලජ ජීවීන් භාවිතයෙන් උග්ර විෂ සහිත බව පුරෝකථනය කරන ලදී: පැය 96-පැය මත්ස්‍ය LC50, 48-පැය ඩී. මැග්නා LC50, සහ පැය 96 හරිත ඇල්ගී EC50.මත්ස්‍ය සහ හරිත ඇල්ගී වලට රම්නොලිපිඩ් ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වල විෂ සහිත බව එක්සත් ජනපද පරිසර ආරක්ෂණ ඒජන්සිය විසින් සංවර්ධනය කරන ලද වින්ඩෝස් සඳහා ECOSAR මෘදුකාංග අනුවාදය 2.2 භාවිතා කර තක්සේරු කරන ලදී.(https://www.epa.gov/tsca-screening-tools/ecological-struct-activity-relationships-ecosar-predictive-model හි මාර්ගගතව ඇත).
කීට නාශක සහ ටර්මයිට් ක්‍රියාකාරකම් සඳහා වන සියලුම පරීක්ෂණ තුන් ගුණයකින් සිදු කරන ලදී.කීට සහ වේයන් මරණ දත්තවල රේඛීය නොවන ප්‍රතිගාමී (මාත්‍රා ප්‍රතිචාර විචල්‍යවල ලඝු-සටහන) මධ්‍ය මාරක සාන්ද්‍රණය (LC50) 95% විශ්වාස අන්තරයක් සමඟ ගණනය කිරීම සඳහා සිදු කරන ලද අතර, Prism® (අනුවාදය 8.0, GraphPad මෘදුකාංගය) Inc. භාවිතයෙන් සාන්ද්‍රණ ප්‍රතිචාර වක්‍ර ජනනය කරන ලදී. ඇමරිකා එක්සත් ජනපදය) 84, 91.
වර්තමාන අධ්‍යයනයෙන් Enterobacter cloacae SJ2 මගින් නිපදවන ක්ෂුද්‍රජීවී ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වල විභවයන් මදුරු කීට නාශක සහ ටර්මයිට් නාශක කාරක ලෙස හෙළිදරව් වන අතර, මෙම කාර්යය මගින් කීට නාශක සහ ටර්මයිට් ක්‍රියාකාරිත්වයේ යාන්ත්‍රණයන් පිළිබඳ වඩා හොඳ අවබෝධයක් ලබා දෙනු ඇත.ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් සමඟ ප්රතිකාර කරන ලද කීටයන් පිළිබඳ histological අධ්‍යයනයන් මගින් ආහාර ජීර්ණ පත්රිකාව, මැද බඩවැල, මස්තිෂ්ක බාහිකයේ සහ ආන්ත්‍රික එපිටිලියල් සෛලවල හයිපර්ප්ලාසියාවට හානි සිදුවී ඇත.ප්‍රතිඵල: Enterobacter cloacae SJ2 මගින් නිෂ්පාදනය කරන ලද rhamnolipid biosurfactant හි ප්‍රතිවිරෝධක සහ larvicidal ක්‍රියාකාරකම් පිළිබඳ විෂ විද්යාත්මක තක්සේරුවකින් හෙළි වූයේ මෙම හුදකලා කිරීම මදුරුවන්ගේ (Cx quinquefasciatus) සහ ටර්මීටස් වල වාහක මගින් බෝවන රෝග පාලනය සඳහා විභව ජෛව පළිබෝධනාශකයක් බවයි.ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වල යටින් පවතින පාරිසරික විෂ බව සහ ඒවායේ විභව පාරිසරික බලපෑම් අවබෝධ කර ගැනීම අවශ්‍ය වේ.මෙම අධ්යයනය ජෛව සර්ෆැක්ටන්ට් වල පාරිසරික අවදානම තක්සේරු කිරීම සඳහා විද්යාත්මක පදනමක් සපයයි.
පසු කාලය: අප්රේල්-09-2024