MAMP-උත්කර්ෂවත් ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරයේ ශක්තිය සහ බඩ ඉරිඟු වල ඉලක්කගත පත්‍ර ලප සඳහා ප්‍රතිරෝධය පිළිබඳ ජානමය-පුළුල් ආශ්‍රිත විශ්ලේෂණය

ශාක හා ව්යාධිජනක ද්රව්ය

ඉලිනොයිස් විශ්ව විද්‍යාලයේ (දැන් යූසී ඩේවිස් හි) ආචාර්ය පැට් බ්‍රවුන් විසින් බඩ ඉරිඟු පරිවර්තන ජනගහනය (එස්සීපී) ලෙස හැඳින්වෙන බඩ ඉරිඟු සංගම් සිතියම්ගත කිරීමේ ජනගහනයක් සපයන ලදී.එය කලින් විස්තර කර ඇති අතර එය එක්සත් ජනපද පරිසරවල ශාක වර්ධනයට සහ සංවර්ධනයට පහසුකම් සැලසීම සඳහා ඡායාරූප-අසංවේදීතාව සහ කුඩා උස බවට පරිවර්තනය කරන ලද විවිධ රේඛා එකතුවකි.මෙම ජනගහනයෙන් රේඛා 510 ක් මෙම අධ්‍යයනයේ දී භාවිතා කරන ලද නමුත් නරක ප්‍රරෝහණය සහ අනෙකුත් තත්ත්ව පාලන ගැටළු හේතුවෙන්, ලක්ෂණ තුනම විශ්ලේෂණය කිරීමේදී සියලුම රේඛා භාවිතා කර නොමැත.අවසානයේ chitin ප්‍රතිචාරය විශ්ලේෂණය සඳහා රේඛා 345 කින් ද, flg22 ප්‍රතිචාරය සඳහා රේඛා 472 කින් ද, TLS ප්‍රතිරෝධය සඳහා 456 කින් ද දත්ත භාවිතා කරන ලදී.B. කුකීLSLP18 වික්‍රියාව Arkansas විශ්වවිද්‍යාලයේ ආචාර්ය බර්ට් බ්ලූම් වෙතින් ලබා ගන්නා ලදී.

MAMP ප්රතිචාර මැනීම

මෙම අධ්‍යයනයේ flg22, (Genscript නාමාවලිය# RP19986) සහ chitin වෙනස් MAMP දෙකක් භාවිතා කරන ලදී.හරිතාගාර තුළ පස් (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) පුරවා ඇති තට්ටු මත තැබූ ඇතුළු කිරීම් වල බඩ ඉරිඟු පැල වගා කරන ලදී.එකතු කරන දිනයේ අමතර කොළ තෙතමනය වළක්වා ගැනීම සඳහා නියැදි එකතු කිරීමට පෙර දින පැලෑටි වලට වතුර දමනු ලැබේ.

රේඛා අහඹු ලෙස සකස් කර ඇති අතර, සැපයුම් හේතූන් මත, පේළි 60 ක කාණ්ඩවල සිටුවනු ලැබීය.සෑම පේළියකටම, පේළියකට බීජ දෙක බැගින් 'පෝච්චි' තුනක් සිටුවා ඇත.සමස්ත ජනගහනය තක්සේරු කරන තෙක් පෙර කණ්ඩායම සැකසූ වහාම පසුකාලීන කණ්ඩායම් රෝපණය කරන ලදී.එක් එක් ධාවන දෙකෙහිම ප්‍රවේණික ප්‍රති-සසම්භාවී කරන ලද MAMP දෙකම සඳහා පර්යේෂණාත්මක ධාවන දෙකක් පවත්වන ලදී.

කලින් විස්තර කර ඇති පරිදි ROS විශ්ලේෂණයන් සිදු කරන ලදී.කෙටියෙන් කිවහොත්, සෑම පේළියක් සඳහාම, විවිධ භාජන 3 ක බීජ හයක් සිටුවනු ලැබේ.ප්රතිඵලයක් වශයෙන් බීජ පැල වලින්, ඒකාකාරිත්වය මත පදනම්ව තුනක් තෝරා ගන්නා ලදී.අසාමාන්ය පෙනුමක් ඇති හෝ බහුතරයට වඩා සැලකිය යුතු ලෙස උස හෝ කෙටි වූ බීජ පැල භාවිතා නොකළේය.දින 15ක් පැරණි විවිධ ඉරිඟු පැල තුනක 4 වන පත්‍රයේ පළල් කොටසෙන් මිලිමීටර් 3 විශ්කම්භයෙන් යුත් පත්‍ර තැටි හතරක් ඉවත් කරන ලදී.ශාක දෙකකින් පත්‍රයකට එක් තැටියක් සහ එක් ශාකයකින් තැටි දෙකක්, දෙවන තැටිය ජල පාලනය බවට පත් වෙයි (පහත බලන්න).තැටි තනි තනිව 50 µl H20 මත කළු ළිං 96 තහඩුවක පාවෙන ලද අතර, ආලෝකයට නිරාවරණය වීම වැළැක්වීම සඳහා ඇලුමිනියම් මුද්‍රාවකින් මුද්‍රා තබා කාමර උෂ්ණත්වයේ එක රැයකින් තබා ඇත.පසුදා උදෑසන ප්‍රතික්‍රියා ද්‍රාවණයක් 2 mg/ml රසායන ද්‍රව්‍ය පරීක්ෂණ L-012 (Wako, නාමාවලිය # 120-04891), 2 mg/ml අශ්ව කරල් පෙරොක්සිඩේස් (Type VI-A, Sigma-Aldrich, නාමාවලිය # P6782) සහ චිටින් 100 mg/ml හෝ Flg22 2 μM.මෙම ප්‍රතික්‍රියා ද්‍රාවණයෙන් 50 µl ළිං හතරෙන් තුනකට එකතු කරන ලදී.සිව්වන ළිඳ ව්‍යාජ පාලනයක් වූ අතර, එයට MAMP හැර ප්‍රතික්‍රියා විසඳුම එකතු කරන ලදී.සෑම තහඩුවකටම ජලය පමණක් අඩංගු හිස් ළිං හතරක් ද ඇතුළත් විය.

ප්‍රතික්‍රියා ද්‍රාවණය එකතු කිරීමෙන් පසු, දීප්තිය මනිනු ලබන්නේ SynergyTM 2 බහු-අනාවරණය මයික්‍රොප්ලේට් රීඩර් (BioTek) භාවිතයෙන් සෑම මිනිත්තු 2කට වරක් පැය 1ක් සඳහාය.මෙම පැය 1 තුළ තහඩු කියවනය සෑම මිනිත්තු 2කට වරක් දීප්ති මිනුම් ගනී.එක් එක් ළිඳ සඳහා අගය ලබා දීම සඳහා සියලු කියවීම් 31 හි එකතුව ගණනය කරන ලදී.එක් එක් ප්‍රවේණි වර්ගය සඳහා MAMP ප්‍රතිචාරය සඳහා ඇස්තමේන්තුගත අගය ගණනය කරනු ලැබුවේ (පර්යේෂණාත්මක ළිං තුනේ සාමාන්‍ය දීප්ති අගය - ව්‍යාජ ළිං අගය) - සාමාන්‍ය හිස් ළිං අගය අඩු කිරීමෙනි.හිස් ළිං අගයන් අඛණ්ඩව ශුන්‍යයට ආසන්න විය.

පත්ර තැටිනිකෝටියානා බෙන්තාමියානා, තත්ත්ව පාලන අරමුණු සඳහා එක් එක් ළිං 96 තහඩුව තුළ පාලනයක් ලෙස ඉහළ ප්‍රතිචාරාත්මක ඉරිඟු රේඛාවක් (SC0003) සහ එක් අඩු ප්‍රතිචාරාත්මක බඩ ඉරිඟු රේඛාවක් (PI 6069) ද ඇතුළත් කර ඇත.

B. කුකීඑන්නත් කිරීම සහ එන්නත් කිරීම

B. කුකීinoculum පෙර විස්තර කර ඇති පරිදි සකස් කර ඇත.කෙටියෙන් කිවහොත්, බඩ ඉරිඟු ධාන්ය දින තුනක් ජලයේ පොඟවා, සෝදා, 1L කේතුකාකාර ප්ලාස්ක් වලට දමා පැයක් 15psi සහ 121 °C දී ස්වයංක්‍රීයව සකස් කරන ලදී.ධාන්‍ය වලට පසුව නැවුම් සංස්කෘතියකින් යුත් මයිසිලියා මිලි ලීටර් 5 ක් පමණ එන්නත් කරන ලදීB. කුකීLSLP18 හුදකලා කර කාමර උෂ්ණත්වයේ සති 2 ක් ඉතිරි වන අතර සෑම දින 3 කට වරක් කුප්පි සොලවන්න.සති 2 කට පසු, දිලීර ආසාදනය වූ බඩ ඉරිඟු ධාන්‍ය වාතයේ වියළා පසුව ක්ෂේත්‍ර එන්නත් කරන තෙක් 4 ° C දී ගබඩා කර ඇත.සම්පූර්ණ අත්හදා බැලීම සඳහා එකම එන්නත භාවිතා කරන ලද අතර සෑම වසරකම නැවුම් ලෙස සාදන ලදී.එන්නත් කිරීම සඳහා, ආසාදිත ධාන්‍ය වර්ග 6-10ක් සති 4-5ක් වයසැති බඩ ඉරිඟු පැලවල තැන්පත් කරන ලදී.මෙම දිලීර වලින් නිපදවන බීජාණු සතියක් ඇතුළත තරුණ බඩ ඉරිඟු පැළවලට ආසාදනය වීමට පටන් ගත්තේය.

බීජ සකස් කිරීම

ඉරිඟු බීජ ක්ෂේත්‍රයේ සිටුවීමට පෙර දිලීර නාශකයක්, කෘමිනාශකයක් සහ ~ 1% Spirato 480 FS දිලීර නාශකයක්, 4% Sebring 480 FS දිලීර නාශකයක්, 3% Sorpro 940 ES බීජ ආරක්ෂිත මිශ්‍රණයක් අඩංගු සේෆ්නර් මිශ්‍රණයකින් ප්‍රතිකාර කර ඇත.ඉන්පසු බීජ දින 3 ක් වාතයේ වියළන ලද අතර එමඟින් බීජ වටා මෙම මිශ්‍රණයේ තුනී ආලේපනයක් ලබා දේ.ආරක්ෂිත වල්නාශක ද්විත්ව මැග්නම් භාවිතයට පූර්ව ප්‍රතිකාරයක් ලෙස අවසර දී ඇත.

ඉලක්ක පත්‍ර පැල්ලම් ප්‍රතිරෝධය ඇගයීම

SCP 2017 ජූනි 14-15 සහ 2018 ජූනි 20 දින Clayton, NC හි මධ්‍යම භෝග පර්යේෂණ ස්ථානයේ සිටුවනු ලැබුවේ එක් එක් අවස්ථාවෙහිදී පර්යේෂණාත්මක අනුරූ දෙකක් සහිත අහඹු සම්පූර්ණ බ්ලොක් සැලසුමක ය.එක් බිම් කොටසකට බීජ 10 බැගින් භාවිතා කරමින් මීටර් 0.9 පේළි පළලක් සහිත මීටර් 1.8 තනි පේළියක අත්හදා බැලීම් රෝපණය කරන ලදී.දාර බලපෑම් වැළැක්වීම සඳහා එක් එක් අත්හදා බැලීමේ පරිධිය වටා මායිම් පේළි දෙකක් සිටුවා ඇත.අත්හදා බැලීම් 2017 ජූලි 20 සහ 2018 ජූලි 20 යන දිනවල එන්නත් කරන ලද අතර එම අවස්ථාවේදී බඩ ඉරිඟු පැල 3 වර්ධන අදියරේ පැවතිණි. ශ්‍රේණිගත කිරීම් එක සිට නවය දක්වා පරිමාණයකින් සිදු කරන ලද අතර එහිදී රෝග ලක්ෂණ නොපෙන්වන ශාක නවයක් සහ සම්පූර්ණයෙන්ම ලකුණු කර ඇත. මිය ගිය ශාක එකක් ලෙස ලකුණු කර ඇත.සෑම වසරකම එන්නත් කිරීමෙන් සති දෙකකට පසුව 2017 දී ශ්‍රේණිගත කිරීම් දෙකක් සහ 2018 දී කියවීම් හතරක් ලබා ගන්නා ලදී.sAUDPC (රෝග ප්‍රගති වක්‍රය යටතේ සම්මත ප්‍රදේශය) කලින් විස්තර කර ඇති පරිදි ගණනය කරන ලදී.