බඩ ඉරිඟු වල ඉලක්කගත පත්‍ර ලපයට MAMP-ප්‍රභවිත ආරක්ෂක ප්‍රතිචාරයේ සහ ප්‍රතිරෝධයේ ශක්තිය පිළිබඳ ජෙනෝමය-පුළුල් සංගම් විශ්ලේෂණය.

ශාක හා රෝග කාරක ද්‍රව්‍ය

ඉලිනොයිස් විශ්ව විද්‍යාලයේ (දැන් UC Davis හි) ආචාර්ය පැට් බ්‍රවුන් විසින් සෝගම් පරිවර්තන ජනගහනය (SCP) ලෙස හඳුන්වන සෝගම් සංගම් සිතියම්ගත ජනගහනයක් සපයන ලදී. එය කලින් විස්තර කර ඇති අතර එක්සත් ජනපද පරිසරවල ශාක වර්ධනයට සහ සංවර්ධනයට පහසුකම් සැලසීම සඳහා ප්‍රකාශ කාලපරිච්ඡේද-සංවේදීතාව සහ කුඩා උස බවට පරිවර්තනය කරන ලද විවිධ රේඛා එකතුවකි. මෙම අධ්‍යයනයේදී මෙම ජනගහනයෙන් රේඛා 510 ක් භාවිතා කරන ලද නමුත් දුර්වල ප්‍රරෝහණය සහ අනෙකුත් තත්ත්ව පාලන ගැටළු හේතුවෙන්, ලක්ෂණ තුනම විශ්ලේෂණය කිරීමේදී සියලුම රේඛා භාවිතා නොකළේය. අවසානයේ චිටින් ප්‍රතිචාරය විශ්ලේෂණය කිරීම සඳහා රේඛා 345 කින්, flg22 ප්‍රතිචාරය සඳහා රේඛා 472 කින් සහ TLS ප්‍රතිරෝධය සඳහා රේඛා 456 කින් දත්ත භාවිතා කරන ලදී.බී. කුකීLSLP18 වික්‍රියාව ආකැන්සාස් විශ්ව විද්‍යාලයේ ආචාර්ය බර්ට් බ්ලම් වෙතින් ලබා ගන්නා ලදී.

MAMP ප්‍රතිචාර මැනීම

මෙම අධ්‍යයනයේදී flg22, (Genscript නාමාවලිය# RP19986) සහ කයිටින් යන වෙනස් MAMP දෙකක් භාවිතා කරන ලදී. හරිතාගාර තුළ පස (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) පුරවා ඇති පැතලි බිම් මත තැබූ ඇතුළු කිරීම් වල බඩ ඉරිඟු පැල වගා කරන ලදී. එකතු කිරීමේ දිනයේ අමතර කොළ තෙතමනය වළක්වා ගැනීම සඳහා නියැදි එකතු කිරීමට පෙර දින ශාකවලට වතුර දමන ලදී.

රේඛා අහඹු ලෙස සකස් කරන ලද අතර, සැපයුම් හේතූන් මත, රේඛා 60 ක කාණ්ඩවල සිටුවනු ලැබීය. සෑම රේඛාවක් සඳහාම, රේඛාවකට බීජ දෙකක් සහිත 'භාජන' තුනක් සිටුවන ලදී. මුළු ජනගහනයම තක්සේරු කරන තෙක් පෙර කණ්ඩායම සැකසූ වහාම ඊළඟ කණ්ඩායම් සිටුවන ලදී. එක් එක් ධාවන දෙකෙහිම ජාන වර්ග නැවත අහඹු ලෙස සකස් කරන ලද MAMP දෙකම සඳහා පර්යේෂණාත්මක ධාවන දෙකක් පවත්වන ලදී.

කලින් විස්තර කර ඇති පරිදි ROS පරීක්ෂණ සිදු කරන ලදී. කෙටියෙන් කිවහොත්, එක් එක් පේළිය සඳහා, බීජ හයක් විවිධ භාජන 3 ක සිටුවා ඇත. ප්‍රතිඵලයක් ලෙස ලැබුණු බීජ පැල වලින් තුනක් ඒකාකාරිත්වය මත පදනම්ව තෝරා ගන්නා ලදී. අසාමාන්‍ය ලෙස පෙනෙන හෝ බහුතරයට වඩා සැලකිය යුතු ලෙස උස හෝ කෙටි වූ බීජ පැල භාවිතා නොකළේය. දින 15 ක් පැරණි විවිධ බඩ ඉරිඟු පැල තුනක 4 වන පත්‍රයේ පළල්ම කොටසෙන් මිලිමීටර් 3 ක විෂ්කම්භයක් සහිත පත්‍ර තැටි හතරක් ඉවත් කරන ලදී. ශාක දෙකකින් පත්‍රයකට එක් තැටියක් සහ එක් ශාකයකින් තැටි දෙකක්, දෙවන තැටිය ජල පාලනය බවට පත් විය (පහත බලන්න). තැටි තනි තනිව කළු ළිං 96 තහඩුවක 50 µl H20 මත පාවී, ආලෝකයට නිරාවරණය වීම වළක්වා ගැනීම සඳහා ඇලුමිනියම් මුද්‍රාවකින් මුද්‍රා තබා, කාමර උෂ්ණත්වයේ එක රැයකින් තබා ඇත. පසුදා උදෑසන 2 mg/ml රසායන ප්‍රදීප පරීක්ෂණ L-012 (Wako, නාමාවලිය # 120-04891), 2 mg/ml අශ්ව කරල් පෙරොක්සිඩේස් (වර්ගය VI-A, සිග්මා-ඇල්ඩ්රිච්, නාමාවලිය # P6782) සහ 100 mg/ml චිටින් හෝ Flg22 2 μM භාවිතයෙන් ප්‍රතික්‍රියා ද්‍රාවණයක් සාදන ලදී. මෙම ප්‍රතික්‍රියා ද්‍රාවණයෙන් 50 µl ළිං හතරෙන් තුනකට එකතු කරන ලදී. සිව්වන ළිඳ ව්‍යාජ පාලනයක් වූ අතර, එයට MAMP හැර ප්‍රතික්‍රියා ද්‍රාවණය එකතු කරන ලදී. සෑම තහඩුවකම ජලය පමණක් අඩංගු හිස් ළිං හතරක් ද ඇතුළත් කරන ලදී.

ප්‍රතික්‍රියා ද්‍රාවණය එකතු කිරීමෙන් පසු, පැය 1 ක් සඳහා සෑම මිනිත්තු 2 කට වරක් SynergyTM 2 බහු-අනාවරණ ක්ෂුද්‍ර තහඩු කියවනය (BioTek) භාවිතයෙන් දීප්තිය මනිනු ලැබීය. මෙම පැය 1 තුළ තහඩු කියවන්නා සෑම මිනිත්තු 2 කට වරක් දීප්ති මිනුම් ලබා ගනී. සෑම කියවීම් 31 ක එකතුවක්ම ගණනය කර එක් එක් ළිඳ සඳහා අගය ලබා දෙන ලදී. එක් එක් ප්‍රවේණික වර්ගය සඳහා MAMP ප්‍රතිචාරය සඳහා ඇස්තමේන්තුගත අගය ගණනය කරන ලද්දේ (පරීක්ෂණාත්මක ළිං තුනේ සාමාන්‍ය දීප්ති අගය - ව්‍යාජ ළිං අගය) - සාමාන්‍ය හිස් ළිං අගය අඩු කිරීමෙනි. හිස් ළිං අගයන් නිරන්තරයෙන් ශුන්‍යයට ආසන්න විය.

කොළ තැටිනිකොටියානා බෙන්තමියානා, තත්ත්ව පාලන අරමුණු සඳහා සෑම ළිං 96 තහඩුවකම පාලනයන් ලෙස ඉහළ ප්‍රතිචාරාත්මක බඩ ඉරිඟු රේඛාවක් (SC0003) සහ අඩු ප්‍රතිචාරාත්මක බඩ ඉරිඟු රේඛාවක් (PI 6069) ද ඇතුළත් කරන ලදී.

බී. කුකීඑන්නත් සකස් කිරීම සහ එන්නත් කිරීම

බී. කුකීකලින් විස්තර කර ඇති පරිදි ඉනොකියුලම් සකස් කරන ලදී. කෙටියෙන් කිවහොත්, බඩ ඉරිඟු ධාන්‍ය දින තුනක් ජලයේ පොඟවා, සෝදා, ලීටර් 1 කේතුකාකාර ෆ්ලාස්ක් වලට දමා පැයක් 15psi සහ 121 °C උෂ්ණත්වයකදී ස්වයංක්‍රීයව ක්ලේව් කරන ලදී. ඉන්පසු ධාන්‍යවලට නැවුම් සංස්කෘතියකින් ලබාගත් මැක්රේටඩ් මයිසීලියා මිලි ලීටර් 5 ක් පමණ එන්නත් කරන ලදී.බී. කුකීLSLP18 හුදකලා කර කාමර උෂ්ණත්වයේ සති 2ක් තබන අතර, සෑම දින 3කට වරක් කුප්පි සොලවනු ලැබේ. සති 2කට පසු, දිලීර ආසාදිත බඩ ඉරිඟු ධාන්‍ය වාතයේ වියළා, පසුව ක්ෂේත්‍ර එන්නත් කරන තෙක් 4 °C හි ගබඩා කරනු ලැබේ. සම්පූර්ණ අත්හදා බැලීම සඳහා එකම එන්නත් කිරීම භාවිතා කරන ලද අතර සෑම වසරකම නැවුම් ලෙස සාදන ලදී. එන්නත් කිරීම සඳහා, සති 4-5ක් වයසැති බඩ ඉරිඟු ශාකවල කරකැවිල්ලට ආසාදිත ධාන්‍ය 6-10ක් දමන ලදී. මෙම දිලීර වලින් නිපදවන ලද බීජාණු සතියක් ඇතුළත තරුණ බඩ ඉරිඟු ශාකවල ආසාදනය ආරම්භ කළේය.

බීජ සකස් කිරීම

ක්ෂේත්‍රයේ සිටුවීමට පෙර බඩ ඉරිඟු බීජ ~ 1% Spirato 480 FS දිලීර නාශකයක්, 4% Sebring 480 FS දිලීර නාශකයක්, 3% Sorpro 940 ES බීජ ආරක්ෂිතයක් අඩංගු දිලීර නාශක, කෘමිනාශක සහ සේෆනර් මිශ්‍රණයකින් ප්‍රතිකාර කරන ලදී. ඉන්පසු බීජ දින 3 ක් වාතයේ වියළන ලද අතර එමඟින් බීජ වටා මෙම මිශ්‍රණයේ තුනී ආලේපනයක් ලබා දෙන ලදී. සේෆනර් මඟින් පූර්ව මතුවීමේ ප්‍රතිකාරයක් ලෙස ද්විත්ව මැග්නම් වල් නාශකය භාවිතා කිරීමට ඉඩ ලබා දෙන ලදී.

ඉලක්කගත පත්‍ර ලප ප්‍රතිරෝධය ඇගයීම

SCP 2017 ජුනි 14-15 සහ 2018 ජුනි 20 යන දිනවල NC හි ක්ලේටන් හි මධ්‍යම බෝග පර්යේෂණ ස්ථානයේ සිටුවනු ලැබුවේ අහඹු ලෙස සම්පූර්ණ බ්ලොක් සැලසුමක වන අතර එක් එක් අවස්ථාවෙහිදී අත්හදා බැලීම් දෙකක් සිදු කරන ලදී. අත්හදා බැලීම් බිම් කැබැල්ලකට බීජ 10 ක් භාවිතා කරමින් මීටර් 0.9 ක පේළි පළලක් සහිත මීටර් 1.8 ක තනි පේළි වල සිටුවනු ලැබීය. දාර බලපෑම් වැළැක්වීම සඳහා එක් එක් අත්හදා බැලීමේ පරිධිය වටා මායිම් පේළි දෙකක් සිටුවනු ලැබීය. අත්හදා බැලීම් 2017 ජූලි 20 සහ 2018 ජූලි 20 යන දිනවල එන්නත් කරන ලද අතර එම අවස්ථාවේදී බඩ ඉරිඟු ශාක වර්ධන අදියර 3 හි පැවතුනි. එක සිට නවය දක්වා පරිමාණයන් මත ශ්‍රේණිගත කිරීම් ලබා ගන්නා ලද අතර, එහිදී රෝග ලක්ෂණ නොපෙන්වන ශාක නවයක් ලෙසත් සම්පූර්ණයෙන්ම මිය ගිය ශාක එකක් ලෙසත් ලකුණු කරන ලදී. සෑම වසරකම එන්නත් කිරීමෙන් සති දෙකකට පසුව ආරම්භ වන 2017 දී ශ්‍රේණිගත කිරීම් දෙකක් සහ 2018 දී කියවීම් හතරක් ලබා ගන්නා ලදී. sAUDPC (රෝග ප්‍රගති වක්‍රය යටතේ ප්‍රමිතිගත ප්‍රදේශය) කලින් විස්තර කර ඇති පරිදි ගණනය කරන ලදී.